DB35T 1712-2017鸭短喙侏儒综合征诊断技术.docxVIP

ICS 11.220 B 41 福 建 省 地 DB35 方 标 准 DB35/T 1712—2017 鸭短喙侏儒综合征诊断技术 Diagnostic technique for beak atrophy and dwarfism syndrome in ducks 2017 - 12 - 25 发布 2018 - 03 - 25 实施 福建省质量技术监督局 发 布 福 建 省 地 方 标 准 鸭短喙侏儒综合征诊断技术 DB35/T 1712—2017 * 2017 年 12 月第一版 2017 年 12 月第一次印刷 I DB35/T 1712—2017 目 次 前言 II 1 范围 1 2 疫病概述 1 3 临床诊断 1 4 限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)诊断 2 5 结果判定 3 附录 A(规范性附录) 相关试剂的配制 4 附录 B(资料性附录) 电泳结果 6 II DB35/T 1712—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由福建省农业科学院提出。 本标准由福建省农业厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心、 江西省萍乡市科学技术情报研究所。 本标准主要起草人：黄瑜、万春和、傅秋玲、施少华、黄勇、傅光华、程龙飞、张体银、刘荣昌、 陈翠腾、陈红梅、陈珍、朱春华。 1 DB35/T 1712—2017 鸭短喙侏儒综合征诊断技术 1 范围 本标准规定了鸭短喙侏儒综合征诊断技术涉及的临床诊断、限制性片段长度多态性聚合酶链反应 (PCR-RFLP)诊断和结果判定的操作技术规程。 本标准适用于鸭(包括番鸭、半番鸭、北京鸭、樱桃谷北京鸭等) 短喙侏儒综合征的临床诊断和实 验室诊断。 2 疫病概述 自2009年以来，我国华东地区部分番鸭、半番鸭和樱桃谷北京鸭发生以喙变短、舌头外露、个别死 亡、耐过鸭出现生长障碍(即侏儒) 、残次鸭比例高为主要临床特征的疫病， 俗称鸭“短喙症”、“大 舌头病”，各日龄鸭均有发生， 主要剖检病变为腿或翅骨折、胸腺出血和部分成年鸭卵巢萎缩， 目前统 称为鸭短喙侏儒综合征(beak atrophy and dwarfism syndrome，BADS) 。 经研究确定该病病原随发病地区和发病鸭品种的不同而有所差异， 引起闽、浙、苏等省番鸭、半番 鸭短喙侏儒综合征的病原为新型番鸭细小病毒(novel Muscovy duck parvovirus， N-MDPV)；而引起 鲁、苏、闽等省樱桃谷北京鸭、北京鸭、半番鸭短喙侏儒综合征的病原为新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus， N-GPV)， 且其临床症状和病理变化明显有别于原经典的番鸭细小病毒(MDPV) 和鹅细小 病毒(GPV) 所致的临床表现。 3 临床诊断 3.1 临床症状 当鸭出现以下部分或全部情形时，可作为初步诊断的依据之一： a) 短喙； b) 生长不良，表现矮小、侏儒； c) 舌头外露； d) 行走异常。 3.2 剖检病变 当鸭出现以下部分或全部剖检病变时，可作为初步诊断的依据之一： a) 胸腺出血； b) 腿或翅骨折； c) 部分鸭胸腺或卵巢萎缩。 3.3 初步诊断 当鸭出现3.1的临床症状之一或3.2中剖检病变之一时， 可做出初步诊断； 需确诊， 应进行实验室进 一步诊断。 2 DB35/T 1712—2017 4 限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)诊断 4.1 样品采集与处理 采集可疑病鸭的胸腺、肝脏或(和)卵巢，尽快冷藏。将采集的组织剪碎处理后，按体积比1： 3 的比例加入磷酸盐缓冲液(PBS， 见附录A中A.1的规定) 制成组织匀浆液， 反复冻融3次， 经8 000 r/min 离心20 min后取上清液分装冻存备用。 4.2 实验仪器设备 主要仪器设备包括： a) PCR 仪； b) 高速台式冷冻离心机； c) 微量移液器； d) 组织匀浆器； e) 电泳仪； f) 电泳槽； g) 紫外凝胶成像系统。 4.3 实验试剂 主要试剂包括： a) 10%的十二烷基磺酸钠(SDS)； b) 蛋白酶 K(10 mg/mL) ； c) 异丙醇； d) Tris ·饱和酚； e) 酚-三氯甲烷-异戊醇(25:24:1)； f) 乙酸钠(3 mol/L， pH5.4)； g) 无水乙醇； h) 75%乙醇； i) 核糖核酸酶(RNAse A， 10 mg/mL) ； j) 灭菌双蒸水。 4.4 引物 根