真菌李瑜的教案.pptxVIP

第1页/共105页真菌李瑜的教案第2页/共105页+600%+300%+300%真菌感染不断增加的现状——Martin et al, NEJM 2003;348:1546第3页/共105页86420787980818283848586878889909192经尸检证实的侵袭性真菌感染All otherCandida spp.Aspergillus spp.Prevalence at Autopsy [%]Groll et al, J Infect 1996;33:23-32.第4页/共105页国内侵袭性真菌感染的发病情况 ——协和医院感染科刘正印等，中华医学杂志2003年3月第83卷第5期第5页/共105页All othersCandida12.9%3.23%Aspergillus9.68%Mucor54.84%19.35%Cryptococcus国内西南医院尸解资料，(1971-2000)，郝飞教授提供第6页/共105页TransplantPatientsSpectrum AntibioticsAIDSOncologyPatientsIntravascular Devices 真菌感染不断增加的原因—第7页/共105页AspergillusCandida条件致病菌机会来了！第8页/共105页临床常见的条件性真菌感染念珠菌病:最常见，占血源感染的第4位。非粒缺病人, SICU常见(肾衰、插管）。曲霉菌病:血液系统恶性肿瘤病人发病 可达30%，BMT常见合并症。隐球菌病: 在艾滋病人发病率为10-20%。 接合菌病（毛霉病）: 多见于重症糖尿病和烧伤、器官移植病人。第9页/共105页临床有增多趋势的条件致病性真菌非白念念珠菌感染 (近平滑、光滑增加)毛孢子菌感染地霉感染镰刀菌感染枝顶孢霉感染暗色真菌感染马内菲青霉病第10页/共105页系统性真菌感染的现状—危及生命的机会性、侵袭性感染不断增加，以念珠菌和曲霉最为常见，其它少见菌感染也在增多；对系统性感染仍然缺乏有效的诊断手段；抗真菌新药在不断增加，仍然不能满足临床需求；预防用药以及经验性药物治疗不断增加，耐药菌株逐渐增加。第11页/共105页真菌感染的诊断第12页/共105页真菌学家临床医师病理学家感染病学家 生产研发者真菌病诊断第13页/共105页真菌感染的实验诊断方法及问题显微镜检查-阳性率？培养-时间？敏感性？意义？血清学-敏感性？特异性？分子生物学-标准化？第14页/共105页真菌病的非培养诊断——乳胶凝集试验检测新生隐球菌抗原ELISA法检测念珠菌和曲霉抗原β -1,3葡聚糖检测免疫组化、原位杂交技术用于深部真菌病诊断寻找种特异性引物并应用于菌种鉴定 ——曲霉、外瓶霉、镰刀菌、孢子丝菌等 PCR？？稳定、特异问题第15页/共105页新生隐球菌乳胶凝集试验第16页/共105页检测曲霉GM抗原的ELISA试验第17页/共105页GM抗原检测用于侵袭性曲霉病诊断与临床诊断和疗效反应有良好的一致性。检测方法有ELISA、放射免疫分析（RIA）和乳胶凝集试验等。Platelia试剂盒采用ELISA方法，敏感性~80%，特异性80%。儿童假阳性10%。Cut-off值影响结果—0.5:早期诊断,特异性差;1.5:特异性提高。可动态观察。Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin第18页/共105页曲霉抗原ELISA检测方法（Platelia试剂盒）48例患者：确诊IA4例，3例阳性；高度怀疑IA13例，8例阳性；可疑IA31例，2例阳性。 灵敏性为64.7%特异性为93.5%假阳性率为6.5%假阴性率为35.3%王，等。临床皮肤科杂志，待发表。第19页/共105页PCR技术用于诊断PCR种特异-PCR非特异 PCR?杂交Standart singlenestedPCR-EIAReal-time原位杂交标本全血血浆血清BAL最低检测范围4-10 cfu/ml25-100 fg DNA目的基因多拷贝基因第20页/共105页PCR过筛试验诊断IA每周监测2次—通用引物;确定采用巢式和实时定量;敏感性100%,特异性65%;早于临床症状2天,早于确诊9天;动态观察持续阴性可排除;Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical Mycology, 23-26 October 2005, Berlin, Germany.第21页/共105页PCR扩增ITS及18S区基因片段ITS18S700bp500bp300bp临床株 参考株临床株 参考株第22页/共105页种特异引物巢式 PCR扩增烟曲霉rRNA基因Jun Zhao et al. JC