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实验三质粒DNA的转化第1页/共12页 实验三 质粒 DNA 的转化第2页/共12页 转化: 将外源 DNA 分子导入到受体细胞(宿主细胞)，使之获得新的遗传特性的过程实验原理宿主细胞：大肠杆菌(E.coli) DH5a菌株 感受态：细胞处于容易吸收外源DNA的状态第3页/共12页 质粒：是存在于细菌染色体以外的小型环状双链DNA，能自主复制和表达其携带的遗传信息。第4页/共12页 TRV2-PDS 质粒图谱第5页/共12页 质粒的转化原理 将对数生长期的细菌置于0℃、CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形(感受态细胞)； 外源DNA分子在此条件下与Ca2+结合形成抗DNA酶的羟基－钙磷酸复合物粘附在细菌表面； 经42℃短暂热激处理，使细胞膜通透性增大，促进细胞吸收DNA复合物。第6页/共12页 单菌落(克隆)转化子的筛选含Kan的选择性培养基 已转化的细菌 (工程菌)能在含Kan的选择性培养基上生长并形成菌落(克隆)，而未转化的细菌则不能生长培养皿第7页/共12页 第8页/共12页 实验流程20ul感受态细胞+5ul质粒DNA轻轻旋转混合 37 ℃,150r/min振摇30 min冰上放置30min 取100ul涂布于含Kan培养基42 ℃,热激90s 室温放置使液体吸收 冰浴5min 37 ℃倒置培养12~16h加1ml LB培养基第9页/共12页 注意事项 1. 感受态DH5α细菌很脆弱，加入TRV2质 粒5μl后，要轻轻旋转混合，禁止剧烈振摇 或吹打。2. 42℃ 水浴90秒，时间和温度要准确，中途 不能摇动离心管。第10页/共12页 注意事项 3. 无菌操作要严格，防止外界细菌污染。4. 细菌铺板密度不能过高，倒置培养时间不 能过长（12～16h内） 。第11页/共12页 感谢您的欣赏第12页/共12页
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