分子生物学课 章.pptxVIP

分子生物学课 章; ;② DNA双链中只有一条链被转录成RNA;14.2 原核生物基因的转录;1.原核生物的RNA聚合酶;细菌的RNA聚合酶全酶： α2ββ′ωσ：～500 kD β和β′亚基 ：催化中心，构成核酸通道； α亚基：核心酶组装所需；也与调节因子作用； σ亚基：启动子识别，具有启动子特异性。 ω亚基？;RNA聚合酶的核心酶结构 （即从全酶中去掉σ亚基）;亚基; 2) σ亚基;细胞中不同状态RNA聚合酶的数量;核心酶与DNA双链的作用比较松散，结合半寿期约1 hr。核心酶不区分启动子和其他序列。 σ亚基加入后，全酶与松散结合位点的结合力下降，半寿期1 s；但与启动子结合可增强1000倍，半寿期达几个小时。 全酶与启动子结合常数基本反映了启动子的强度。; 2. 转录过程;第13页/共44页;细菌启动子特征： 1、起点通常是一个嘌呤； 2、起点上游10 bp处，有一约6 bp的保守区域，称为-10 区（也叫Pribnow Box），共有序列为： T80 A95 T45 A60 A50 T96 ； 3、起点上游35 bp处，有一约 6 bp的保守区，称为-35 区，共有序列为： T82 T84 G78 A65 C54 A45； 4、90%的启动子中，-10与-35区的距离在16-18bp之间；两个保守区之间的序列并不重要，但距离很关键。;第15页/共44页;σ因子与启动子的结合;σ70的2.4区的氨基酸与启动子-10区非模板链特异碱基的结合; RNA聚合酶对启动子的识别可能有三种方式:;全酶-启动子形成闭合二重复合体； 闭合复合体转变为开放复合体； 整合进最初两个核苷酸，形成一个磷酸二酯键，形成三重复合体； 在酶不需要移动时，即可加入9个核苷酸，但在加入核苷酸过程中，随时可能释放RNA； 起始成功后，释放出σ亚基。;RNA聚合酶结合在DNA上时，其长度会发生变化; ;转录过程中的模板识别、起始与延伸;终止子（terminator）：终止RNA合成反应所需的DNA序列；在转录结束的位点，提供终止信号。 RNA合成的终止实际依赖于已转录的RNA序列。 终止发生有两种方式。;不依赖于ρ因子的终止子（intrinsic terminators ） ;第25页/共44页;依赖ρ因子的终止;ρ先结合于RNA链上； 沿 RNA链移动； RNA聚合酶在终止子处暂停； ρ因子追上聚合酶并使之解离，并拆分RNA-DNA杂???链。;3. 原核生物RNA转录后的加工; rRNA的加工过程是以核糖体颗粒的形式进行的，即rRNA前体合成后先与蛋白质结合，形成新生核糖体颗粒，而后再经过一系列的加工过程，生成有功能的核糖体。 在原核生物中，rRNA包括三种，即16S，23S和5S rRNA。在大肠杆菌中，这三种rRNA的基因形成一个转录单位，其中还包含一个或多个tRNA基因，它们之间由间隔区分开。;3) tRNA的加工 ;14.3 真核生物RNA的转录过程;种类;(2) 真核生物的启动子;帽子位点：即转录起始位点，碱基大多为A。 TATA box：位于RNA聚合酶II转录起点上游约- 25 bp处的保守的7碱基序列，绝大多数情况下全部是A-T碱基对，只有少数含有G-C。 CAAT box：起点上游-75附近的小段保守序列。 增强子（enhancer）：可增强启动子效率的序列，可位于启动子上游或下游；可远距离作用。;RNA聚合酶Ⅱ在转录时需要一些辅助蛋白质因子即转录因子（transcription factor,TF），这些因子和酶一起构成一个转录结构，识别特定的启动子序列。; 3）RNA聚合酶III的启动子; ;2)真核mRNA的剪接 ; ; ;14.4 催化活性RNA—核酶及其功能; L19 RNA以高度特异的方式催化寡聚核糖核苷酸的裂解和联结反应。五胞核苷酸（C5）被L19 RNA转变为更长一些和更短一些的寡聚体。具体地说，C5被降解为C4和C3。与此同时，又能生成C6和更长一些的聚合物。可见，L19 RNA既是一个核糖核酸酶，又是下一个RNA聚合酶。; ;感谢观看！