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ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠ＣｕＺｎＳＯＤ基因ＣｐＧ岛甲基化的研究（论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“病毒学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文8642字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠ＣｕＺｎＳＯＤ基因ＣｐＧ岛甲基化的研究 2 1 材料和方法 2 1．3 方法 3 2 结果 4 3 讨论 4 文2：HtrA基因缺陷对肺炎链球菌毒力影响的研究 5 1材料和方法 6 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠ＣｕＺｎＳＯＤ基因ＣｐＧ岛甲基化的研究（论文资料） 文1：ＡｐｏＥ基因缺陷小鼠ＣｕＺｎＳＯＤ基因ＣｐＧ岛甲基化的研究 DNA甲基化是DNA分子复制后的一种共价修饰方式，导致DNA结合蛋白与DNA主螺旋沟的结合能力降低，从而在不改变基因结构的基础上够调控基因的表达。本研究运用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR，MSP）对apoE基因缺陷小鼠与正常的C57BL/6J小鼠肝脏CuZOD基因启动子区CpG岛甲基化状态进行检测，以探讨CuZOD基因甲基化与AS发生发展的关系。 1 材料和方法 1．1 标本来源 本研究采用7周龄雄性apoE基因缺陷小鼠，该小鼠购自美国Jackson实验室，由中山大学北校区实验动物中心繁殖提供；此外本研究还采用7周龄雄性C57BL/6J小鼠（清洁级）为对照，由中山大学北校区实验动物中心提供。将18只7周龄apoE基因缺陷小鼠和18只正常的7周龄C57BL/6J小鼠饲养一周以适应环境后随机各分成三组，将第一组小鼠处死，余以AIN-93G饲料分别饲养至第7周和第14周处死，分离小鼠肝脏，－80℃冻存待测。 1．2 试剂和仪器 95％乙醇购自安徽安特生物化学有限公司；氢氧化钠购自广州化学试剂厂；亚硫酸氢钠、氢醌购自Sigma公司；醋酸钠、醋酸购自汕头市化学试剂厂；无水乙醇购自天津富宇精细化工有限公司；DNA 提取试剂盒购自TaKaRa公司（日本）; Wizard plus sv minipreps DNA Purification system购自 promega公司；PCR引物由上海生工合成；PerfectShotTM Taq(Loading dye Mix)、50 bp DNA Ladder Marker购自Takara公司；琼脂糖购自西班牙Biowest；Tris碱购自Sigma公司；Na2EDTA．2H2O、硼酸购自天津市福晨化学试剂厂；分析天平（Swiss Mettler AE160公司）；-80℃低温冰箱（Japan SANYO 公司）；低温高速离心机（Germany eppendorf 公司）；梯度PCR仪（Germany Hybaid GmbH 公司）；BIO-RAD电泳仪、电泳槽（U．S．A Bio-Rad 公司）；凝胶成像及分析系统（France Vilber Lourmat 公司） 1．3 方法 1．3．1 肝脏DNA的提取 将分离出来的肝脏取50 mg放入研钵中，加液氮研磨至粉末状，然后加入650 μl solution A和0．9 μl 的RNase A1后，再研磨1 min。收集650 μl研磨好的组织匀浆移至2．0 ml collection tube中，加入1 ml的4℃预冷的solution C及400μl的solution B，弃去上层有机相，然后将水相溶液（无色下层）转移至置于collection tube 的Filter cup中，12，000rpm离心1 min。最后12，000rpm离心1 min洗脱DNA，-20℃保存备用。具体实验步骤严格按照Univeal Genomic DNA Extraction Kit (TaKaRa)说明书进行。 1．3．2 模版DNA亚硫酸盐修饰 取DNA 2 μg，加双蒸水至46．7 μl。然后加入3 mol/l NaOH 3．3 μl， 37℃水浴10 min，使DNA充分变性。加入10 mM氢醌 30 μl及3 mol/l NaHSO 3 52O μl(pH 5．0)（氢醌和NaHSO3要新鲜配制），在上面加矿物油100 μl，53℃孵育16 h。将处理过的DNA溶液转移至wizard column中过柱，加入54 μl双蒸水（65℃）洗脱DNA， 在虑液中加入3 mol/l NaOH 6 μl、6 μl 3 mol/l的醋酸钠（pH5．2）、150μl冻无水乙酸，混匀，-40℃ 5 h。4℃ 13