仪器分析 第十八章HPLC.pptVIP

本 章 要 求： 掌握： 熟悉： 1）高效液相仪的流程和主要部件； 2）高效液相色谱仪的主要部件、紫外检测器、荧光检测器和蒸发光散射检测器检测原理和适用范围 ； 3）色谱分离条件及溶剂系统选择的一般原则。 （四）离子对色谱和离子抑制色谱 1．反相离子对色谱法 2．反相离子抑制色谱 1．反相离子对色谱法（IPC或PIC） 反相离子对色谱法：反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加k和tR，以改善分离。 1）离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱 四丁基季胺盐→分析酸 2）影响k的因素 a．与流动相的极性有关（同反相色谱） b．与R的链长有关：R↑长，极性↓小， tR↑，k↑ c. 溶液pH也会影响k 3）适用：较强的有机酸、碱 2．反相离子抑制色谱 反相离子抑制色谱：在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制组分解离，增加其k和tR，以达到改善分离的目的。 1）离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质 pH一定的缓冲溶液 2）k的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关 选择流动相：应同时考虑极性及pH值 酸性物质——加入酸HAc ， tR↑，k↑ 碱性物质——加入碱NH3·H2O， tR↑，k↑ 调节pH范围：3.0~8.0 pH8.0 破坏键合相与载体的结合 pH3.0 腐蚀柱子 3）适用：极弱酸碱物质，两性化合物 pH=3~7，弱酸； pH=7~8，弱碱； 其它色谱法 （自学） 二、速率理论（与GC对比） 续前 续前 图示 （1）非极性键合相 键合相表面基团为非极性烃基（如C18，C8，十八烷基硅烷ODS等） （2）弱极性键合相 （醚基和二羟基键合相等）； （3）极性键合相 （氨基、氰基键合相）。 续前 1、HPLC对流动相的基本要求： 1）与固定液不反应 2）对样品有良好溶解度 k=1~10,其中 k=2~5 最理想的 3）与检测器匹配： UV（常用，测定波长应大于溶剂的截止波长）； 荧光；电化学 4）使用粘度小、纯度高的流动相（甲醇，乙腈）使用前过滤、脱气 二、 化学键合相色谱法的流动相 2． 续前 3．洗脱方式 2）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性（两个泵） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵），类似GC的等温度洗脱 高效液相色谱仪流程图 1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质） 2．高压泵（输液泵） 3．进样装置 4．色谱柱——分离 5．检测器——分析 6．废液出口或组分收集器 7．记录装置 第四节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪流程图 第五节 高效液相色谱仪 2．进样装置 1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室） GC系统压力较小，可以 HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 2）阀进样：不必停泵，六通阀 1．泵： 恒压泵：流量精度不稳 恒流泵：常用 续前 直径4~6mm,柱长10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验 R，n，fs（拖尾因子） 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗 3．色谱柱： 1）紫外检测器：适于吸收紫外光的物质 2）荧光检测器：只能分析自身发光的物质 灵敏度高 3）示差折光检测器：利用折光率的差别 灵敏度低，温度要求严格 4）电化学检测器 5）化学发光 4．检测器 第五节 高效液相色谱分析方法 定量： 1、外标法 2、内标法 一、定性和定量方法 定性：tR和tR 续前 （2）高分子多孔小球：YSG 原理：吸附+分配