细胞毒理学实验细胞遗传毒性检测.pptVIP

加入少量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。 学习文档 用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml左右室温下静置20-30分钟，进行低渗。低渗结束后，加入1mlCarnoy固定液进行预固定（5分钟左右），轻轻混匀后，离心。 学习文档 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液6ml，混匀后，室温固定30分钟，再次离心去上清，重复固定一次，离心后，根据沉淀的体积向沉淀中加入0.5-1ml预冷的固定液（甲醇：冰醋酸=1：1），将细胞重悬。 学习文档 预冷的玻片 学习文档 滴片后，须将片子晾干，再滴加适量Giemsa染液染色10-15分钟，弃去染液，水洗，镜检。 学习文档 结果显示 有丝分裂指数（mitoticindex）：某一分裂组织或细胞群中，处于有丝分裂M期的细胞数占其总细胞数的百分数。 分裂相细胞数 有丝分裂指数 = ———————— 细胞总数 学习文档 实验组 对照组 有丝分裂指数 平均值 取秋水仙素不同剂量组染色体制片，各随机选取3-5个视野，统计各视野内的有丝分裂指数，并可对结果进行统计学分析（独立样本T检验），比较两组数据有无显著性差异。 学习文档 小鼠骨髓细胞微核显示 学习文档 实验注意事项 小鼠解剖残渣不要放入下水道。 实验结束后，请将实验用小鼠及垃圾放入垃圾袋，值日生务必带走。 实验中使用的过滤细胞的尼龙滤网请勿丢弃，实验完毕后放入白瓷盘并用玻璃漏斗或试剂瓶压住。 学习文档 细胞遗传毒性检测 1-小鼠骨髓细胞染色体制备 及有丝分裂指数的测定 2-微核的显示 学习文档 目的要求 掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法. 了解有丝分裂指数的计算。 了解微核的显示方法及其意义。 学习文档 实验原理 骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。 学习文档 实验用品 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等. 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1;甲醇：冰醋酸＝1：1 ）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液、0.9%生理盐水等。 3．材料：小鼠 学习文档 实验设计 学习文档 方法与步骤 注射量随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 学习文档 引颈处死或断头处死小鼠。 学习文档 取出小鼠的前肢骨和后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。 学习文档 滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。 学习文档 学习文档