盐酸去氢骆驼蓬碱原位凝胶的制备及应用.pdfVIP

摘要 目的：结直肠癌是一种常见的严重危害人类健康的恶性肿瘤，是指发生于结肠或者是直肠的 癌变，尤以直肠、乙状结肠最为常见，在全球范围内，结直肠癌发病率在所有恶性肿瘤中位 居第三位，男性发病率高于女性。结直肠癌发病早期缺乏特异性症状表现而容易被患者忽视。 维族药盐酸去氢骆驼蓬碱 （harmine,HM）已证实对结直肠癌有显著的抑制作用。但HM 在 全身注射时可引起中枢神经毒性，限制了其临床应用。在本研究中，我们制备了HM 原位 凝胶制剂用于结直肠部位的局部给药，并评价其体内外抗结直肠癌的应用效果。 方法：(1)使用高效液相色谱 （HPLC）法建立HM 含量测定方法。(2)采用单因素实验设计， 考察HM、苯扎溴铵、泊洛沙姆407 （P407）和泊洛沙姆 188 （P188）用量对凝胶温度的影 响，然后采用星点设计-响应面法优化HM 原位凝胶配方，对P407、P188 以及羟丙基甲基 纤维素 （HPMC）的用量进行优选。(3)通过检测HM 原位凝胶的粘度、直肠滞留力，体外 释放情况确定最优处方。(4)体外应用评价：CCK-8法考察HM 原位凝胶对结肠癌CT26细 胞增殖抑制能力；Annexin V-FITC/PI 双染色法测定HM 原位凝胶诱导的凋亡细胞百分率； 划痕法考察HM 原位凝胶抑制CT26 细胞迁移能力。(5)体内应用评价：将CT26 细胞经直 肠黏膜下注射到BALB/c 小鼠的直肠部位，建立结直肠癌小鼠模型，通过肿瘤体积、肺组织 的病理切片、肿瘤的凋亡情况和生存率来评价药物体内抗肿瘤效果。 结果：(1)HPLC 法HM 含量的方法学验证结果显示，HM 在 2.5-200 μg/mL 浓度范围内与 峰面积线性关系良好，精密度及加样回收率符合要求。(2)单因素实验表明，苯扎溴铵和HM 对凝胶化温度影响不明显，而P407 随着浓度的增加，凝胶化温度逐渐降低，但P188 随着 浓度的增加，胶凝温度是逐渐升高的。星点设计结果与单因素考察结果一致，且HPMC 对 凝胶温度变化影响不大。直肠滞留结果显示HM 原位凝胶在大鼠直肠给药后不会出现泄漏， 且能在体内滞留6h 以上，其体外释放符合Weibull 模型。最终确定最优处方为HM 1.2%， HPMC 0.93%，P1882.13%，P40720.7%，苯扎溴铵 0.02%。(3)体外应用结果显示，HM 原 位凝胶对 CT26细胞具有明显的增殖抑制能力；HM 原位凝胶可以诱导CT26细胞的凋亡， HM 原位凝胶组晚期凋亡细胞比例为(19.11%± 1.61%)；HM 原位凝胶可以抑制CT26细胞 的横向迁移。(4)小鼠体内应用结果显示，HM 原位凝胶组的瘤重、肺组织肿瘤转移、肿瘤 凋亡面积和生存率结果均优于对照组、空白凝胶组和HM 纯药组。 结论： （1）建立的HM 含量测定方法符合实验要求。 （2）制备的HM 原位凝胶理化性质 良好，制备工艺设计合理。 （3）在体内外应用中，HM 原位凝胶对结直肠癌的生长和转移 均有明显的抑制作用。并且HM 原位凝胶组的体内抗肿瘤效果优于HM 纯药组并且在一定 程度上降低了HM 的毒性。综上所述，HM 原位凝胶对结直肠癌具有明显的抗肿瘤应用效 果，有望成为治疗结直肠癌的一种有应用前景的给药新制剂。 关键词：结直肠癌；盐酸去氢骆驼蓬碱；原位凝胶；直肠给药 I Abstract Object: Colorectal cancer is a common malignant tumor that seriously endangers human health. Colorectal cancer refersto a cancerous change that occursin the colon or rectum,most commonly in the sigmoid colon andrectum.Globally,the incidenceof colorectal cancer isthethirdhighest in all malignancies, with a higher incidence among male than among female. The lack of specific symptoms in the early stage of colorectal cancer makes it easy