课件：第二章-蛋白质的结构与功能.pptVIP

三、蛋白质的变性 吴宪教授1931年：“天然Pr分子借助次级键连接而成一种紧密，有规则的空间结构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。 1. 蛋白质的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素的作用下，Pr严格的空间结构被破坏 （不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生 物学性质改变的现象。 变性后的蛋白质称变性蛋白,能使Pr变性的物质叫Pr变性剂。 变性因素 物理因素 高温、高压 紫外线、X射线、 电离辐射和超声波等 化学因素 强酸、强碱 有机溶剂、重金属盐 高浓度尿素、盐酸胍等 变性实质： 破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、 MW不变）。 变性蛋白质的特点 旋光性、光吸收改变等； ①生物学活性丧失 ②理化性质改变 ③易被蛋白酶水解 溶解度↓，沉降率↑， 粘度↑， 扩散速度↓， 酶水解。 变性与复性 变性 可逆变性：Pr变性后如将变性剂除去，该Pr分子的天然构象和生物学 活性还能恢复。 不可逆变性：若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性 质难以恢复。 举例：医疗；生物制品保存；生活等。 变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。 总结：Pr变性、沉淀与凝固之间的关系 变性Pr不一定沉淀 沉淀Pr不一定变性 变性Pr不一定凝固 凝固的Pr一定变性 四、蛋白质的沉淀与凝固 定义： 蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出 的现象称为沉淀。 + + + + + + + + - - - - - - - - + + + + + + + + - - - - - - - - 蛋白质胶体颗粒的沉淀 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 酸 酸 碱 碱 脱水 脱水 脱水 不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀） 带正电荷的蛋白质 （疏水胶体） 带负电荷的蛋白质 （疏水胶体） 碱 酸 （亲水胶体） （亲水胶体） （亲水胶体） 1、蛋白质的紫外吸收 大部分蛋白质均含有带共轭双键的Tyr（色氨酸）和Trp（络氨酸）等芳香族氨基酸。这两种AA分子中的苯环在280nm 附近有特征性吸收峰。在此波长范围，蛋白质的（光密度值）OD280与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定量测定。 五、蛋白质的其他理化性质 蛋白质浓度mg/ml＝1.45A280-0.74A260 反应 试剂 颜色 反应基团 有此反应的Pr及AA 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质 Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 Tyr 黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr 乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 Trp 坂口反应 次氯酸钠,萘酚 红色 胍基 Arg Folin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色 2、蛋白质的颜色反应 单元小结 蛋白质结构 蛋白质功能 蛋白质结构与功能的关系 蛋白质的理化性质 一、名词解释 氨基酸残基 亚基 构型和构象 变构效应 Pr的两性电离 Pr的pI 盐析 蛋白质变性 复习思考题 1.为什么说：“蛋白质是生命的物质基础”？ 2.简述蛋白质?螺旋和?折叠的结构特点。 3.什么是Pr的一、二、三和四级结构，分别指出 维持它们结构的化学键。 4.举例说明Pr结构与功能的关系。 5.简述Pr变性、沉淀和凝固的定义及彼此之间的关系。 二、问答题 1 天然蛋白