课件：蛋白质的化学.ppt

层析的主要设备 3.密度梯度离心法 滴加样品 蔗糖密度梯度 蔗糖浓度 CsCl密度梯度离心 （三）根据电离性质不同的分离纯化方法 1.电泳法：带点质点在电场中向电荷相反的方向移动。 ①醋酸纤维膜电泳 ②聚丙烯酰胺凝胶电泳 ③等电聚焦电泳 ④免疫电泳 ⑤二维电泳 2.离子交换层析：离子交换纤维素、 离子交换凝胶、 大孔型离子交换树脂 等电聚焦电泳 2.离子交换层析分离蛋白质 蛋白质浓度 洗脱体积 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 收集样品的管 收集样品的管 带负电荷的蛋白质 蛋白质混合物 玻璃柱 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 带正电荷的蛋白质 收集样品的管 NaCl NaCl梯度 （五）利用配体的特异性亲和力的纯化方法 应用 分离纯化酶、 抗原、抗体 分离纯化核酸 研究酶的结构与功能 + 待纯化分子 配体 a. 理论依据：待纯化分子和配体间具有亲和性 + 基质 b. 活性基质与配体结合产生亲和吸附剂 + + 杂质 c. 待纯化分子与亲和吸附剂结合，与杂质分离 + d. 偶联复合物经解离后，得到纯的待纯化分子 基质 纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、 sepharose、sephadex 亲和层析原理示意图 蛋白质混合物 配体 与配体结合的蛋白质 加入的可溶性配基 专一性结合蛋白质 没有结合的蛋白质 非专一性结合蛋白质 蛋白质浓度 洗脱体积 与配体专一性结合蛋白质 加入配基 基质 1.蛋白质的纯度鉴定 蛋白质纯度鉴定通常采用物理化学的方法：层析法、电泳法、免疫化学法。 1.层析纯 2.电泳纯：电泳图谱只呈现一个条带（或 峰）；HPCE 3.免疫纯 2.蛋白质的含量测定的方法 ① 凯氏定氮法 ② Folin一酚试剂法（Lowry法） ③ 双缩脲法 ④ 紫外分光光度法 ⑤ BCA法 ⑥ Bradford蛋白分析法 作业 1.蛋白质的功能 2.蛋白质结构与功能的关系 3.蛋白质的变性定义、本质、特征、意义 4.氨基酸两性离解 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 血红蛋白的一、二、三、四级结构 （一）肽的人工合成 保护（氨基、羧基、侧链活性基团） 活化（氨基、羧基） 缩合剂 （二）胰岛素的人工合成（三）固相肽合成 五、肽与蛋白质的人工合成 第四节 蛋白质的结构与功能 蛋白质分子的一级结构是形成空间结构的物质基础。 蛋白质分子特定的天然构象是蛋白质生物功能的体现。 一、蛋白质一级结构与功能的关系 一级结构不同，生物学功能各异 加压素 H2N- 半胱 – 酪- 苯丙- 谷胺 – 天胺 –半胱-脯- 精-甘-CO-NH2 缩宫素 H2N- 半胱 – 酪- 亮- 谷胺 – 天胺 –半胱-脯- 异亮-甘-CO-NH2 一级结构中关健部分相同，其功能相同 ACTH ACTH活性必需部分 -丝-酪-丝24丝--谷苯丙-COO- H3N+ 1 2 3 24 31 33 39 -丝-酪-丝24亮--谷苯丙-COO- H3N+ -丝-酪-丝24丝--谷胺苯丙-COO- H3N+ 人 猪 牛 一级结构关键部分的变化，其生物活性也改变 多肽或蛋白质 氨基酸位置 相对活性 脑啡肽（5肽） 衍生物 甘2 蛋5 D-丙 蛋-CO-NH2 1 10 P84 一级结构的变化与疾病的关系 例：镰刀形红细胞贫血 N-val · his · leu · thr · pro · glu · glu · · · · ·C(146) HbS β肽链 HbA β肽 链 N-val · his · leu · thr · pro · val · glu · · · · ·C(146) 这种由遗传物质DNA突变引起的、在分子水平上仅存在微观差异而导致的疾病，称为“分子病”。 镰刀形红细胞 正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图 正常红细胞 二、蛋白质的空间构象与功能的关系 1.蛋白质前体活化 P85 2.蛋白质变构 3.蛋白质构象改变与疾病 当配体与亚基（蛋