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注射雪胆乙素在大鼠体内药动学探究 ［摘要］建立血浆样品中雪胆乙素的测定方法，研究 雪胆乙素在大鼠体内的药动学特征。大鼠经尾静脉注射给 药，以苯海拉明为内标(internal standard, IS),采用液 相色谱-串联四级杆质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)法测定不同时间点大鼠血 浆中雪胆乙素浓度。质谱采用电喷雾(ESI)离子源，多反 应监测模式正离子检测，确定目标化合物及内标的离子对分 别为 m/z 503.2/113. 1 和 m/z 256. 0/167. 2 o 色 谱柱为 Ag订ent ZOBAX SB-C18 (2. 1 mmX50 mm, 1. 8 u m),甲醇 -0. 1%甲酸55 : 45等度洗脱，流速为0.2 mL - min-lo采用 DAS 2.0软件对所得的血药浓度进行拟合，求算相应的药动 学参数。大鼠经尾静脉注射雪胆乙素3.0mg-kg-l,目标物 血浆质量浓度在10.5?3 150 U g ? L-1内线性关系良好 (R2二0.996),标准曲线定量下限为10.5 ug ? L-1,信噪比 S/N=12；日内精密度RSD 精密称取内标盐酸苯海拉明 对照品1. 14 mg,置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至 刻度，配成苯海拉明质量浓度为100 mg ? L-1的内标储备液。 精密量取内标储备液，用甲醇稀释成质量浓度为50 U g ? L-1 的内标溶液，置于-4冰箱中备用。 2.4标准溶液血浆样品的配制 精密量取雪胆乙素对照 品储备液，甲醇逐级稀释得0. 105, 0. 315, 1. 05, 3. 15, 10. 5, 31. 5 mg - L-1系列对照品标准溶液。取上述对照品溶液各 20 uL,加入180 uL空白血浆，配成雪胆乙素血浆质量浓 度分别为 10.5, 31. 5, 105, 315, 1 050, 3 150 u g ? LT 的标准血浆样品。 2.5质控血浆样品的配制 按2.4项方法制备雪胆乙素 低、中、高3个质量浓度质控血浆样品(分别为31.5, 315, 2 835 ug ? L-1) o 2.6血浆样品的处理 取血浆样品50 uL,依次加入甲 醇100 UL,内标溶液50 U L,涡流混合1 min,沉淀蛋白, 于1万r ? min-1离心5 min,取上清5 uL进行LC-MS/MS 分析。 2.7药代动力学实验 健康雄性Wistar大鼠6只，给药 前12 h禁食，自由饮水。尾静脉注射雪胆乙素3. 0 mg ? kg-1 ［用生理盐水和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80) 将雪胆乙素溶解配成质量浓度为0.3 g-L-1的澄清尾静脉 注射液，吐温80质量分数 实验采用电喷雾(ESI)离 子源，选择多反应监测(MRM)模式以正离子进行质谱扫描, 同时选择和检测2组特定且直接相关的离子对，实现对前体 离子和产物离子同时监测。在本实验色谱条件下，既能与生 物样品中的内源性基质实现分离，又使得待测物在较短的时 间内出峰。在色谱分离过程中还发现，若在流动相中加入适 量的甲酸灵敏度显著提高，于是选择在流动相中加入0. 1% 的甲酸以提高灵敏度。 本文采用LC-MS/MS建立了定量分析血浆中雪胆乙素的 方法，首次考察了雪胆乙素在大鼠体内的药动学研究。尾静 脉注射雪胆乙素的药动学参数AUCO-t为 (811.615±111.578 ) ug ? h ? L-l , tl/2 为 (1. 285±1. 390) h, CL 为(3. 627±0. 487) L ? h ? kg-1, Vd为(6. 721±7. 429) L - kg-lo该法操作简便、快捷，具 有分析时间短(5. 1 min)、灵敏度高(10.5 Pg ? L-1)的 优点，已成功应用于雪胆乙素注射液在大鼠体内药动学研 究，为其在临床研究和新药设计提供理论基础和依据。 [参考文献] 董建勇，岳磊，邵薇薇，等.中华雪胆化学成分研 究(III) [J].中国中药杂志，2012, 37 (6)： 814. 聂瑞麟.葫芦科植物三菇皂就研究十年进展 (1980-1992) [J].云南植物研究，1994, 16 (2)： 201. 白敏，李宏亮，徐贵丽.雪胆属植物化学成分及药 理活性研究进展[J].昆明医学院学报,2O12,33(1B)： 177. Chen J C, Niu X M, Li Z R, et al. Four new cucurbitane glycosides from Hemsleya jinfushanensis[J]. Planta Med, 2005, 71 (10)： 983. Fuller R W,