外源抗原在蜡样芽胞杆菌细胞表面展示的可行性-研究.pdfVIP

f卑中农业人学2009扁硕I：学位论文 菌中，S一层可以作为毒力因子(Virulencefactor)，例如，杀鲜气单胞菌(鱼的一种病原 and Beveridge， 菌)的S-层对免疫和非免疫血清的补体杀菌活性均具有抵抗性(Sleytr 1999)。总之，拥有S．层的细菌广泛存在，因此S．层的功能应是多样化的。 1．2．2S．层蛋白在疫苗研制中的应用 与其他表面蛋白相比，用S．层蛋白作为微生物细胞表面展示的载体蛋白具有无 eta1．，1993)， 可拟的优势：第一，S．层蛋白表达量高，可达细胞蛋白的15％(Sleytr 并能在细胞生长和分裂的所有阶段完全覆盖在细胞表层，这说明S．层蛋白基因具有 很强的启动子，这极利于它所携带的外源基因的表达；第二，S．层蛋白能容许大片 段外源序列的插入，插入的外源序列不明显影响重组S．层蛋白的生物合成和表面定 位，而且不明显影响宿主细胞的正常生长，即S．层蛋白对外源序列具有较强的包容 性，在利用S．层蛋白进行微生物细胞表面展示的应用中，活菌疫苗的研制是最引人 注目的。国外学者在这一领域展开了大量的研究，在我国刘梅等利用苏云金芽胞杆 菌的S．层蛋白成功展示了NP、HAl、pMGA等禽类病原体抗原(表1．1)。 表1．1S．层蛋白在疫苗研制中的应用举例 Tablel．1 about of on vaccine Examplesapplicationsproteinsdeveloping 4 源抗原n．蜡样萍胞杆菌…胜表由挂*的¨行忡Ⅲ究 1．23苏云金芽胞杆菌杆菌s．层蛋白CTC表面展示系统 苏云金芽胞车下菌BMBl71菌株是无质粒不形成伴胞晶体的突变株，对昆虫不具 有致病性，是用于研制基因工程菌的良好受体(李林和喻子牛，1999)。以苏云金芽 胞杆菌CTC菌株的s．层蛋白CTC为展示蛋白．以合成的多聚组氨酸肽和*淀粉酶 为展示蛋白，以BMBl71为展示菌株，已初步构建了苏云金芽胞杆菌s一层蛋白细胞 表面展示系统。该系统包括：受体菌株BMBl71、含s-层蛋白基因ctc的载体质粒 etal，2004；吴怀 5)。 光等，2004)(图1 7“ —吣^■}自●m自a山■■￡■* aama40,十■●∞“h±K瞎#目 tIbh—删dc埘■’晴-¨H¨j^ M■·一0．Ih盘●啦■dsuamao, 图1．4苏云金芽胞杆菌cIc基因和csaAB操纵元示意图 Gene ctcandits csaAB Figa．4 ofS-layerproteingene upstreamoperon map 刘梅(刘梅，2007)利用这个系统已成功将外源抗原禽流感病毒核衣壳蛋白NP、 血凝素蛋白HA和鸡毒霉形体粘附素蛋白pMGA成功展示于苏云令芽胞杆菌细胞的 表面，小鼠和鸡的免疫学实验均证实，所构建的重组菌株均具有不同程度的免疫原 性。 1 3疫苗食品及其应用 所谓“疫苗食品”是基因工程界针对传统疫苗的种种局限，通过细胞嫁接、基 因改良等生物工程技术开发出来的食品．对增进人类和动物体的健康具有积极的意 义(王长青，1999)。疫苗食品生产技术是将微生物的有关蛋白质(抗原)基因，通 过转基因技术导入某些植物或动物受体细胞中，并使其在受体细胞中得以表达，从