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维生素E对继发性脊髓损伤保护作用实验研究 　　【摘要】 目的 探讨维生素E对兔急性脊髓损伤(ASCI)保护作用的机制。方法 新西兰大白兔51只，随机分为3组，A组：正常组，B组：ASCI组，C组：ASCI＋维生素E处理组。3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)腹腔注射麻醉，常规消毒铺巾，显露L1-3棘突及椎板，显露硬膜。A组在显露硬膜后予以止血后缝合伤口。B、C组按改良的Allen’s重物打击法制备ASCI模型，在急性脊髓损伤后30 min，给B组腹腔注射生理盐水1 ml/kg，C组腹腔注射维生素E10 mg/kg。48 h后每组随机抽取10只动物处死，以打击处为中心切取伤段脊髓0．8 cm长，将标本从中间分两半，一半常规HE染色，光镜下观察其组织学形态改变，另一半作水量测定。每组2只兔经灌流固定后，取损伤段脊髓常规制作透射电镜标本。于两星期后观察3组剩余5只动物行为学指标。数据进行统计学分析。结果 各损伤段脊髓含水量均高于正常对照组(P 　　【关键词】维??素E;急性脊髓损伤;自由基;兔 　　 　　在我国，随着工业、交通的发展，ASCI发患者数逐年增高，但临床治疗效果并不令人满意。Allen将急性脊髓损伤分为原发性损伤和继发性损伤两个阶段。原发性损伤是在受伤的一瞬间由外力产生的决定性的、不可逆的损伤[1]。继发性损伤是脊髓原发性损伤之后由于各种因素引起的脊髓再损伤，所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤[2]。本实验通过Allen’s重物坠落(weight drop WD)法模型，探讨维生素E对ASCI 的保护作用，为临床应用提供理论依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1 实验动物 健康新西兰大白兔51只，均为24周龄以上，雌雄不限，体重2．5~3．0 kg(平均2．8 kg)，白求恩国际和平医院实验动物中心提供，采用标准饲料，饮用自来水。 　　1．2 动物分组 随机分为3组，每组17只，A组：正常组，B组：急性脊髓损伤组，C组：急性脊髓损伤+维生素E处理组。 　　1．3 模型制备 51只兔术前禁食过夜，自由饮水，背部正中手术区脱毛。3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)腹腔注射麻醉，麻醉效果满意后，将动物俯卧位固定于手术台上。手术区常规消毒，铺盖无菌手术单，以L2为中心行后正中切口3 cm，显露L1-3棘突及椎板，切除棘突、椎板及黄韧带，造成一长约1 cm，宽约0．5 cm骨窗，显露硬膜。A组在显露硬膜后予以止血后缝合伤口。B、C组按改良的Allen’s重物打击法制备急性脊髓损伤模型。将自制的铜制薄垫片(8 mm×4 mm×0．5 mm)平放于硬膜上，用自制的30 g重的钢棒在玻璃管的引导下行重力打击，打击强度由预实验确定，为30×9(g?cm)，打击完毕后冲洗止血，逐层缝合伤口，在急性脊髓损伤后30 min，给B组腹腔注射生理盐水1 ml/kg，C组腹腔注射维生素E10 mg/kg。术后置于恒温箱内饲养，标准饮食，自由饮水、活动，人工排尿，每日腹腔注射青霉素15万U/（kg?d），C组腹腔注射维生素E20 mg/（kg?d），B组腹腔注射生理盐水2 ml/（kg?d）。每日密切观察四肢活动情况，无感染及死亡患者。 　　1．4 取材 48 h后随机每组随机抽取10只动物用耳缘静脉栓塞法处死，于原切口显露脊髓，以打击为中心取伤段脊髓0．8 cm长，将标本从中间分两半，一半作组织学检查，用10%中性福尔马林固定，另一半作水含量测定。先用生理盐水将其表面血液冲净，再用显微器械轻柔去除硬膜，滤纸吸干水分后装于瓶中称重，置于-20°C冰箱备用。 　　1．5 组织水含量测定 将冻存标本取出，于电烤箱(100°C)放置24 h烤干称重，按Elliot公式计算含水量：组织含水量＝(湿重-干重)/湿重×100%。 　　1．6 组织病理学检查 标本经固定包埋染色等程序后光镜下观察其组织学形态改变。 　　1．7 电镜观察 每组2只兔经灌流固定后，于损伤中心切取电镜标本，迅速切成1 mm3的小块后置于3%戊二醛中固定，经固定脱水包埋切片后，醋酸双氧铀和枸橼酸铅染色，在日立H-7500透射电镜下观察，拍照片。 　　1．8 行为学指标(采用盲法观察) 于两星期后对每组剩余5只动物进行盲法观察，并进行行为学评分。斜板试验：以Molt斜板测量动物在斜板上维持5 s不下滑的最大角度。 　　1．9 统计分析 数据采用SPSS12．0统计软件进行结果分析，水含量、行为学指标以均数±标准差(x±s)表示，比较用单因素方差及t检验进行统计学处理。 　　 　　2 结果 　　 　　2．1 伤段脊髓组织含水量比较 各损伤组伤段脊髓含水量均高于正常对照组(P[1]。原发性损伤是指受伤时由于骨折的移位、脱位引起椎间盘脱入椎管及骨折片刺入