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浅析从柿叶中提取多糖工艺研究 　　摘 要:对柿叶中可溶性粗多糖的提取工艺进行了研究,通过单因素试验研究了温度、时间、醇沉比、水煮次数对多糖提取率的影响。结果显示温度和浸提次数是影响多糖提取率的主要因素,最佳工艺为温度70℃,时间3h,醇沉比4:1,浸提次数3次,在最佳提取工艺时,柿叶的多糖提取率为2.16%。 　　关键词:柿叶;可溶性多糖;提取工艺 　　 　　多糖是由单糖基通过糖苷键连接而成的化合物,越来越多的研究证明,多糖不但能治疗使机体的免疫系统受到严重损伤的癌症,还能治疗多种免疫缺损疾病,如慢性病毒肝炎和某些细菌和病毒引起的慢性疾病,还能治疗风湿病之类的疾病,有的多糖还能诱导干扰素的产生。总之,多糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗病毒病菌、降血糖血脂、抗溃疡等作用。目前多糖的分离分析仍是比较活跃的研究领域。 　　柿叶是柿树科柿树属植物柿的新鲜或干燥叶。柿树为常绿或落叶乔木或灌木,生长在热带和温带,其中我国柿树产量占世界总产量的50%以上。柿叶中含有多种对人体有益的营养成分和药用成分,具有很高的营养价值和药用价值。能增加毛细血管的致密性、降低其渗透性和脆性,稳定和降低血压,增加冠状动脉血流量,刺激造血功能,净化血液、改善血液功能,增加抗体、提高免疫力,延缓组织细胞的衰老过程,防治坏血病、动脉硬化、高脂血症、高血压、冠心病、脑溢血、糖尿病、贫血、癌症、脱肛、各种急慢性传染病和感染疾病等,还可以达到减肥的效果。丰富的维生素C可改善皮肤代谢,使皮肤娇嫩、滋润,具有良好的美容效果。 　　从柿叶中提取粗多糖工艺的研究还鲜见报道。近年来对多糖提取工艺的研究方法较多,如热水浸提法、稀碱液浸提法、稀酸液浸提法。但因为稀酸、稀碱条件下,易使多糖发生糖苷键的断裂,部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少,因此本文采用热水浸提法。 　　一、实验部分 　　(一)主要材料、试剂及仪器 　　柿叶:采集于河南省郑州市郊区,清洗、除杂、晒干后粉碎备用。无水乙醇、丙酮、无水乙醚、苯酚、浓硫酸、葡萄糖、三氯乙酸、正丁醇(均为分析纯)。 　　微型高速万能试样粉碎机:北京市永光明医疗仪器厂;SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵:河南省巩义市英峪豫华仪器厂;数显恒温水浴锅:常州国华电器有限公司;TU-1800PC型紫外可见分光光度计:北京普析;800型低速离心机:金坛市华峰仪器有限公司;RE-52c型旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;SZ-93自动双重纯水蒸馏器:上海亚荣生化仪器厂。 　　(二)多糖的提取流程 　　将柿叶原料用无水乙醇回流脱脂,再抽滤至干燥,然后加入一定量的水,在一定温度下进行一定时间的提取,提取液经过减压浓缩得浓缩液,浓缩液用数倍量乙醇醇析得粗多糖沉淀,抽滤,沉淀分别用无水乙醇、无水乙醚、丙酮依次洗涤,真空干燥后得粗多糖产品。 　　(三)多糖含量的测定 　　本实验采用苯酚一硫酸法测定总的多糖含量。苯酚一硫酸法是利用糖类遇浓硫酸水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,于487nm处有最大吸收。本实验先利用标准葡萄糖溶液用苯酚-硫酸试剂处理后在487nm处的吸光度制作标准曲线,再测定待测样品溶液的吸光度,根据回归方程计算相应的浓度从而求出多糖含量。 　　二、结果与讨论 　　(一)多糖含量的测定 　　在实验条件下,以浓度(C)为横坐标,以吸光度(A)为纵坐标作图,得标准曲线。 　　回归方程为: 　　A=0.0113C+0.0196(相关系数r=0.9988) 　　多糖提取率=(VxCxfxW2/W3xW1)x100% 　　W1:称取干样品的质量(g) 　　W2:由W1提取的粗多糖的质量(g) 　　W3从W2中称取的用于分析测定的粗多糖质量(g) 　　V:溶解W3定容后的体积(L) 　　f:多糖的校正系数[4],f≈0.9 　　C:由回归方程计算所得多糖的浓度(g/L) 　　(二)温度、时间、醇沉比、浸提次数对柿叶粗多糖提取率的影响 　　热浸提工艺涉及三个关键条件:热浸提的温度、时间、醇沉比、水煮次数单因素。浸提温度采用60℃、70℃、80℃、90℃、100℃五个水平,浸提时间采用1、2、3、4、5h五个水平,醇沉比(无水乙醇:浓缩提取液,体积比)采用1:1、2:1、3:1、4:1、5:1五个水平,水煮次数采用1、2、3、4、5五个水平分别进行单因素试验。 　　1.温度的影响 　　改变温度对多糖提取率的影响如图一所示。试验结果表明:温度对柿叶多糖的提取率有显著的影响。随着温度的上升,多糖提取率先增大后减小,70℃条件下多糖的提取率达到最大。 　　2.时间的影响 　　改变时间对多糖提取率的影响如图二所示。时间单因素试验表明:随着热浸提时间的增加,柿叶多糖提取率呈增加趋势,3h后变化趋