马奶酒中抗单增李斯特氏菌细菌素产生菌筛选及鉴定.docVIP

马奶酒中抗单增李斯特氏菌细菌素产生菌筛选及鉴定 　　摘要：从内蒙古传统乳制品马奶酒中分离出１４４株乳酸菌，通过双层琼脂平板扩散法筛选出具有明显抑菌作用的菌株。在排除有机酸、Ｈ２Ｏ２等的干扰后，其中１株乳酸菌的发酵上清液对受试的单核细胞增生李斯特氏菌表现出明显的抑制作用；进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后，其抑菌活性显著增强，说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质，可能是细菌素。经生理、生化试验和形态学观察，将该菌株鉴定为屎肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃoｍ）。 　　关键词：马奶酒；乳酸菌；细菌素；筛选；鉴定 　　中图分类号：Ｓ８７９．１；ＴＳ２０１．３文献标识码： Ａ文章编号：0439－８114（２０11）08－1659-03 　　 　　Screening for Anti-Listeria monocytogenes Bacteriocin-producing Lactic Acid 　　Bacteria from Koumiss 　　 　　ＷＵ Ｊｉｎｇa，b，ＭＡＮＧ Ｌａｉa，ＨＥ Ｙｉｎ-ｆｅｎｇb 　　（a． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；b． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Inner Mongolia Agricultural University，Ｈｏｈｈｏｔ ０１００１８， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： １４４ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｋｏｕｍｉｓｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｏｒ ａｎｔｉ－Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ ａｇａｒ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ａｆｔｅｒ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃａｔａｌａｓｅ， ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｏｆ ｏｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｎａｍｅｄ ＭＫＢ６３ ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉ－Ｌｉｓｔｅｒｉａ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ｂｙ ｐｈｙｓｉｏ??ｏｇｉｃａｌ－ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ． Ａｆｔｅｒ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｐｈａｔｅ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ， ｄｉａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ； ｂｕｔ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｏｕｌｄ ｌｏｓｔ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒｙｐｓｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｍａｔｅｒｉａｌ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｈａｄ ｔｈｅ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ， ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ａｓ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｋｏｕｍｉｓｓ； ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ； ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ； ｓｃｒｅｅｎ； ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 　　 　　马奶酒是一种以鲜马奶为原料，经乳酸菌和酵母菌共同发酵而成的乳酸－酒精发酵乳饮料，它在我国草原游牧民族中有着悠久的历史。能够舒筋活血、驱寒通络、排毒、消食健胃、促进新陈代谢、增强肝脾功能和提高人体免疫力［１－３］。马奶酒所具有的医疗保健作用与其所含有的微生物菌群有着密切的关系。 　　乳酸菌（Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ，ＬＡＢ）是一类能从可发酵碳水化合物（主要是指葡萄糖）中生产大量乳酸的细菌的通称［４］，它们广泛存在于人和禽畜的肠道、食品、物料及少数临床样品中。乳酸菌代谢能够产生有机酸、过氧化氢、双乙酰和细菌素等多种抗菌物质。这些抗菌物质通过抑制腐败菌和病原菌的生长而防止腐败，现已被广泛应用于食品加工、医药保健、饲料发酵及畜禽疾病防治等方面［５，６］。细菌素是在乳酸菌代谢过程中通过核糖体合成机制产生的，并分泌到环境中的一类对革兰氏阳性菌具有抑制作用的杀菌蛋白或多肽，主要抑制同源的细菌，产细菌素菌株自身对细菌素具有免疫性 ［７，８］。同时，细菌素以其无毒性、对热稳定、易被人体消化道分泌的酶降解等特性，被公认为是具有潜在开发能力的天然食品防腐剂和饲料添加剂［９，１０］。目前已被分离获得并实际应用的乳酸菌细菌素有双球菌素、乳酸链球菌素、乳杆菌素