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秦美猕猴桃高频遗传转化再生体系建立 　　摘要：以秦美猕猴桃茎段为外植体，在原代培养成功获得无菌试管苗的基础上，进行愈伤组织诱导培养。将获得的秦美猕猴桃愈伤组织转入再分化培养基中，采用正交设计试验，添加不同种类及不同浓度的植物生长调节物质，组成９种不同的再生植株分化培养基，对秦美猕猴桃愈伤组织进行再分化培养。结果表明，诱导培养基中添加１．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ暗培养，有利于秦美猕猴桃愈伤组织的形成，诱导率达１００．０％；再分化培养基中添加３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．1 ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋５０ ｇ／Ｌ蔗糖，能明显提高秦美猕猴桃愈伤组织再分化率。这种方法把诱导愈伤组织与再分化分开进行，可以获得更多的愈伤组织进行再分化培养基的优化，也有利于进行秦美猕猴桃的遗传转化研究。 　　关键词：秦美猕猴桃；组织培养；愈伤组织；再分化 　　中图分类号：Ｓ６６３．４；Ｑ８１３文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）14－2993-02 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｋｉｗｉｆｒｕｉｔ （Ｑｉｎｍｅｉ） 　　 　　ＹＵＡＮ Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ 　　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｅｉｎａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｎａｎ ７１４０００，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａ ｃｖ． Ｑｉｎｍｅｉ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｃａｌｌｕｓ ａｆｔｅｒ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｇａｉｎｅｄ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｃａｌｌｉ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｐｌａｃｅｄ ｏｎ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅ???ｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｓｕｃｈ ａｓ ６－ＢＡ ａｎｄ ＮＡＡ ｗａｓ ａｄｄｅｄ ｔｏ ｃｏｍｐｏｓｅ ｔｈｅ ９ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ Ｌ９（３４） ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｄｄｉｎｇ １.0 ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ａｎｄ ０．１ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ｉｎ ｄａｒｋ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｔｏ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｏｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｓ ｈｉｇｈ ａｓ １００％． Ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ＭＳ＋ ３．０ ｍｇ／Ｌ ６ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋50 g/L ｓｕｃｒｏｓｅ； ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｓｈｏｏｔｓ． Ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｈｏｏｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｉｓ method; and more callus could be obtained for further study； thus was advantageous to kiwifruit genetic transformation. 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｋｉｗｉｆｒｕｉｔ； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｃａｌｌｕｓ； ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ 　　 　　猕猴桃是雌雄异株植物，倍性复杂，杂交育种周期长［１］。因此，组织培养技术已成为猕猴桃快速繁殖的重要途径［２］。在组织培养过程中，不同种类植物生长调节剂以及同一种植物生长调节剂的不同浓度都会影响猕猴桃愈伤组织植株的再生［３－５］。开展不同植物生长调节剂对猕猴桃愈伤组织植株再生的影响研究，有利于筛选出一种高效快速的猕猴桃愈伤组织植株再生方法，为猕猴桃大规模生产、遗传转化及品种改良研究奠定基础。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　以西安市长安区优质栽培的秦美猕猴桃的一年生带腋芽枝条为试验材料。 　　１．２方法 　　１．２．１秦美猕猴桃无菌苗原代培养剪取秦美猕猴桃一年生带腋芽枝条的新嫩枝，用自来水冲洗附着的泥土、灰尘等杂物，放入烧杯中，加入适量洗衣粉，再在自来水下冲