专题1.2 基因工程的基本操作程序2017-2018学年高二生物人教版选修3.doc

专题1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 1．从基因文库中获取 基因文库种类：_______________________________________。 2．利用PCR技术扩增目的基因 （1）含义：是一项在生物体外__________________的核酸合成技术 （2）原理：__________________。? （3）过程：第一步，加热至90~95 ℃ DNA解链为__________________；第二步，冷却至__________________，引物与两条单链DNA__________________；第三步，加热至70~75 ℃，____________________________________从引物起始进行互补链的合成。? （4）特点：__________________形式扩增。? 3．人工合成法：如果基因较小，核苷酸序列又已知，可以通过________________用化学方法直接人工合成。? 基因表达载体的构建 1．组成：目的基因、__________________、__________________、标记基因。? 2．功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以__________________给下一代；使目的基因能够__________________和发挥作用。? 3．启动子：位于基因的首端，是________________酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。? 4．终止子：位于基因的尾端，功能是终止__________________。? 5．标记基因：鉴别受体细胞中是否含有__________________，从而将符合要求的受体细胞筛选出来。? 三、将目的基因导入受体细胞 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内___________________________的过程。 1．将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法（采用最多的方法） 农杆菌特点：易感染__________________植物和裸子植物，对__________________植物没有感染力；Ti质粒的__________________可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的__________________上。 转化过程：构建的表达载体转入__________________→导入植物细胞→__________________→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 （2）基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （3）花粉管通道法：我国独创的一种方法 2．将目的基因导入动物细胞 （1）方法：____________________________________。 （2）操作程序：目的基因表达载体 →取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到__________________性动物的__________________内发育→新性状动物。 3．将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：__________________、多为__________________、__________________相对较少等。 （2）大肠杆菌最常用的转化方法是：__________________处理细胞，成为__________________细胞→表达载体与感受态细胞混合→__________________细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 1．检测及方法 （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了__________________，采用DNA分子杂交技术。? （2）检测目的基因是否转录出了__________________，采用分子杂交技术。? （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质，采用__________________技术。? 2．鉴定：除了分子检测外，还需要进行__________________水平的鉴定，如抗虫、抗病鉴定等。? 一、1．基因组文库、cDNA文库 2．（1）复制特定DNA片段 （2）DNA双链复制 （3）单链 50 oC左右 结合 Taq酶 （4）指数 3．DNA合成仪 二、1．启动子 终止子 2．遗传 表达 3．RNA聚合 4．转录过程 5．目的基因 三、维持稳定和表达 1．（1）双子叶 单子叶 T-DNA 染色体DNA 农杆菌 将目的基因插入染色体的DNA上 2．（1）显微注射法 （2）雌 输卵管或子宫 3．（1）繁殖快 单细胞 遗传物质 （2）用钙离子 感受态