生长抑素施他宁对结肠癌SW480细胞生长抑制和凋亡作用实验研究.docVIP

生长抑素施他宁对结肠癌SW480细胞生长抑制和凋亡作用实验研究 　　【摘要】目的:探讨应用生长抑素类似物施他宁对人结肠癌细胞株SW480细胞的生长抑制和凋亡作用，及细胞周期的影响。方法：采用MTT比色法测定不同浓度施他宁对SW480细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪测定SW480细胞细胞周期分布、增殖指数、凋亡率。结果：生长抑素施他宁能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480细胞增殖（P 　　【关键词】生长抑素；结肠癌；增殖；凋亡；奥沙利铂 　　【中图分类号】R735.35【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）04-0095-02 　　随着我国人均寿命的延长，大肠癌发病率逐年升高，大肠癌已成为当前我国癌症病人死亡的主要疾病之一[1]，预后较差。而其早期诊断和根治办法尚未有突破性进展，开展对大肠癌发病机制和临床干预的研究，是目前大肠癌临床治疗的迫切要求。大肠癌临床化疗方案选择上，常规化疗药物因其毒副作用而受到限制。近年来临床发现非细胞毒性抗肿瘤药物如生长抑素（somatostatin，SST）类似物等对肿瘤细胞有抑制增殖、促进凋亡作用。本研究通过观察生长抑素施他宁对人结肠癌细胞SW480细胞的增殖凋亡有无影响，为临床治疗肿瘤提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞、主要试剂和仪器:SW480人结肠腺癌细胞株（中国科学院上海细胞生物所）；注射用生长抑素施他宁（瑞士雪兰诺公司）；小牛血清（浙江省杭州四季青生物公司）；四甲基噻唑氮蓝（MTT，Fluka公司）；二甲基亚枫（SIGMA公司）；胰蛋白酶（Amresco公司）；RPMI1640（GIBCO公司）；Bio-Tek酶联免疫检测仪（PE公司，型号ELX-800）；流式细胞仪（Bechman Coulter公司，EPICS-XL型）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 SW480细胞培养:SW480细胞用RPMI 1640培养液加10%小牛血清，置于37℃、5% CO2培养箱中常规培养。实验取对数生长期细胞，胰酶消化，制成细胞悬液。普通光镜400倍观察细胞形态变化。 　　1.2.2 MTT法检测SW480细胞增殖：实验分为空白对照组，溶媒对照组和施他宁药物处理组（1,2,5,10,50μg/ml），每组设3个复孔，以不含细胞的RPMI 1640培养液为空白对照组（调零组），各组细胞按不同处理后培养24、48、72 h，检测时加入20μl MTT（浓度为5mg/ml）???继续孵育4 h，弃上清后每孔加二亚基甲砜150μl，振荡溶解，酶联检测仪测定570 nm波长处的光吸收值OD 值（570）。细胞增殖抑制率按下列公式计算：细胞抑制率（%）[对照组OD－实验组OD]/对照组OD×100%。 　　1.2.3 流式细胞仪测定SW480细胞周期及增殖指数：取常规传代的SW480细胞，每组3瓶，用含0.1%小牛血清的RPMI-1640培养基处理24h进行细胞周期同步化后，分别加入不同浓度的药物。培养24小时对数生长期收集细胞，2000r/min，离心10分钟，弃上清液，振荡，无菌PBS洗涤,重复3次.振荡后加入-4℃的95%乙醇1ml固定,上流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率。 　　1.3 统计学方法:应用SPSS12.0统计软件，数据以均数±标准差（x±s）表示,采用单因素方差分析和t检验，检验水准取α0.05；采用LSD（Least Significant Difference Test）检验法进行组间两两多重比较，P[2]用八肽生长抑素类似物奥曲肽处理结肠癌SW480细胞，结果发现奥曲肽对SW480细胞具有明显的抗增殖及诱导凋亡作用，且呈剂量依赖性及时间依赖性，并伴有细胞周期阻滞，G0/G1期细胞明显增加，这与本研究中14肽生长抑素类似物施他宁对SW480细胞的作用结果相似。 　　表2 流式细胞仪测定施他宁对SW480细胞的凋亡率（x±s，n3） 　　备注：※ vs controlP[3]。国外研究表明应用生长抑素及其类似物能明显抑制许多大肠癌细胞株的生长，但对于其受体阴性的肿瘤细胞株并无作用，表明生长抑素发挥抗增殖作用主要是通过于其受体结合而实现。国外Radulovic等[4]报道大肠癌上生长抑素受体高表达。国内董涛涛等[5]报道大肠癌上生长抑素Ⅱ受体在32例原发的大肠肿瘤组织中均有表达。大肠癌细胞能产生和分泌可促进或抑制其生长的胃肠激素，而其细胞膜上同时具有该激素的受体，这样肿瘤细胞产生和分泌的促生长性或抑制生长性的激素作用于自身细胞受体，从而发挥其生物效应.通过阻断大肠癌的自馈性调节或促进自控性调节机制，可用于大肠癌的内分泌治疗生长抑素施他宁是一种含有14肽的环状多肽类激素，人体内分布甚广，广泛存在于脑、垂体、胰腺、胃肠道、肾