il 1β对体外海马神经干细胞增殖及分化的影响-effects of il 1β on proliferation and differentiation of hippocampal neural stem cells in vitro.docx

目 录目 录…………… ……………………… ……………………… ……………………Ⅰ 中 文 摘 要 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … Ⅱ 英 文 摘 要 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … Ⅸ缩 略 词 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ⅩⅥ一、前 言 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1二、材 料 和 方 法 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 4 三、实 验 结 果 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1 2 四、讨 论 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 2 9 五、总 结 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 3 7 参 考 文 献 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 3 8 文 献 综 述 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 4 1 个 人 简 历 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 4 7 致 谢 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 4 8摘 要背景和目的抑郁的发病机制尚不清楚，关于抑郁的病因也有很多种理论假说，其中海马神经元的 损伤和再生障碍在抑郁的发病过程中越来越受重视。海马是大脑中神经元可再生的重要区 域之一，海马中的神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)是神经元的前体细胞，对于神经元的 数量再生与维持有重要影响。体外实验表明炎性细胞因子白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1 β)能抑制海马神经祖细胞的增殖，因此，研究 IL-1β在抑郁症发病过程中的作用和机制， 不仅有利于揭示抑郁症的发病机制，也将为开发新型抗抑郁药物提供新的靶点。本课题组前期的研究成果证明：腹腔注射脂多糖、腹腔注射利血平均可引起大鼠的行 为性抑郁，同时脑内不同区域的细胞因子 IL-1β的升高，脑内注射 IL-1β 受体拮抗剂可以 部分改善这种行为性抑郁，给予腺苷受体拮抗剂咖啡因和 A2A 受体拮抗剂可以部分逆转这 种行为性抑郁；脑室内注射 IL-1β可以诱导大鼠的行为性抑郁；体外 IL-1β能剂量依赖性 的抑制海马神经元的活性，降低 BDNF 表达,CREB-BDNF 通路可能在其中有着至关重要的 作用，NMDAR 可能参与其中。上述研究表明 IL-1β与行为性抑郁有着密切的关系，关于 其分子生物学机制可能与抑制脑源性神经生长因子﹙BDNF)的表达降低有关。本实验拟进一步探究 IL-1β对于神经元的前体细胞－神经干细胞活性的影响及其机 制，并研究 A2A 受体及 NMDA 受体在其中的作用，以及 IL-1β对于神经干细胞分化成神 经元和星形胶质细胞的影响。材料和方法1. 海马神经干细胞的培养、鉴定24h 内 SD 大鼠新生鼠 3－4 只，断头取脑，分离两侧海马，机械吹打成为单细胞悬液， 加入含 10%FBS 的 DMEM/F12 培养液，置入 37℃、5％CO2 培养箱 30min，去除为成纤维 细胞，24h 后弃掉上清液，重新加入含 10%FBS 的 DMEM/F12 新鲜培养液培养 72h，离心弃掉上清液，换用神经干细胞培养液(含 2% B27、20ng/ml bFGF 及 20ng/ml EGF 的DMEM/F12 培养液)，3－4 天换液，7－8 天传代一次。连续纯化培养约 21 天，以作实验 用 材 。 神 经 干 细 胞 高 度 选 择 性 单 克 隆 抗 体 Nestin ( 巢 蛋 白 ) 行 免 疫 细 胞 化 学 ﹙ immunocytochemistry, ICC)鉴定。2. IL-1β对神经干细胞增殖的影响及机制以 IL-1β孵育神经干细胞 3 天换液并取出一半细胞，测细胞活性。剩余细胞再补足新 鲜培养液及药物继