物理化学实验实验五 邻二氮菲分光光度法测定铁含量-722s讲解材料.pptVIP

2014年12月 邻二氮菲分光光度法测定铁含量 实验目的 通过本实验了解分光光度法的基本原理和基本方法。 2. 掌握邻二氮菲吸光光度法测定铁的方法。 3. 学习吸光光度法测定铁吸收曲线和标准曲线的绘制方法。 4. 了解分光光度计的构造、性能及使用方法。 一、分光光度法 分光光度法(spectrophotometry): 根据物质的分子对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，是应用分光光度计测量溶液在某一波长下的吸光度以确定溶液中被测物质含量的分析方法。 透光率（Transmittance） 一、分光光度法 I0 It Ia I0 = Ia + It 透光率 入射光 透射光 T的取值范围：0.0%~100.0% 全部吸收：0.0% 全部透射：100% 结论：溶液的透光率越大，表示它对光的吸收越小；反之，透光度越小，对光吸收越大。 吸光度 吸光度（Absorbance） 一、分光光度法 实验证明：溶液吸光度，与溶液浓度、液层厚度和入射光波长等因素有关。 I0 It Ia 入射光 透射光 在分光光度法中，当条件一定时，吸光系数（ε、a）均为常数，此时溶液的吸光度（A）与有色物质的浓度成正比。 三、 比较法求未知品浓度 同一实验中所使用的比色杯厚度b相等，相同的被测物，其a亦相同，将两式相除得： 四、标准曲线法求未知品浓度 A标 = abc标 Y = k · X A标(Y) c标(X) A未 c未 五、分光光度计使用方法 五、分光光度计使用方法 722s可见分光光度计预热20分钟以上。（接通电源-左侧面长方形按钮为开关，开启进行预热） 机器调零：开盖调零模式，按以下步骤操作： 将样品池盖子打开-（面板上）“模式”按键调到透射比-“0%”按键（透射率为零）-关上盖子按“100%”按键（透射率100%），调零工作结束。 如果没有进行测试，样品池盖子一定处于开盖状态！！ 五、分光光度计使用方法 测试样品步骤：（整个过程样品池盖关闭） 空白样品调零：1号溶液为空白样品（1号溶液透光率为100%），利用拉杆（轻轻调节拉杆即可）使光路对准空白样品进行调零， “模式”按键调到透射比-“100%”按键（光全部退通过1号溶液，相当于将背景吸光度扣除掉） 注意：只要波长λ有变动，就要进行1号空白样品调零操作 调零结束后，进入吸光度模式，就可以将样品调到与光路对应位置进行吸光度测试。读取吸光度数值、记录。 注意：一定要耐心等待约1分钟左右，读数稳定后才可按动按键进行0%或100%调节操作！！ 五、分光光度计使用方法 邻二氮菲（邻菲罗啉）是目前分光光度法测定铁含量的较好试剂，在pH=3~9的溶液中，试剂与Fe2+生成稳定的橙红色配合物该显色反应中铁必须是亚铁状态，因此，在显色前要加入还原剂，如盐酸羟胺，反应如下： 2 Fe3+ + 2NH2OH·HCl + 2H2O = 2 Fe2+ + N2↑ + 4 H3O+ + 2Cl- 六、显色剂