20110608病理科常用实验室检测介绍.pptVIP

* * * 描述重点：美国一项必威体育精装版研究（ToGA实验）显示，HER2基因扩增的晚期胃癌病人，使用Herceptin治疗可有效延长胃癌患者的生存期。在美国临床肿瘤学会（ASCO）2009年会上这一研究结果被正式公布。这一发现成为需要根据病患基因特性进行个性化治疗的又一个例证。根据此次研究，ASCO会议指出晚期胃癌患者在确诊时都应接受HER2检测，而Herceptin将成为HER2阳性晚期胃癌患者的治疗选择。 可以扩展：　 注意： 描述重点：表皮生长因子是酪氨酸激酶受体 ，正常细胞中EGFR基因少表达或不表达，EGFR基因异常时，EGFR酪氨酸激酶被激活，激发其下游一系列信号传导途径，促进肿瘤发生发展 。IRESSA可阻断酪氨酸激酶活化, 从而抑制EGFR 激活 . 可以扩展：　 注意： 描述重点： K-ras是重要的EGFR通路下游的效应子，研究发现在约15%-30%的肺腺癌中有K-ras突变并且和吸烟有关。 EGFR和K-ras突变在肺癌患者中相互排斥。即K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用；而K-ras野生型患者就很有可能从这类药物治疗中获益。 可以扩展：　 注意： 描述重点： 可以扩展：　 注意： 描述重点： 90%的KRAS基因突变位于2号外显子的第12和13密码子位点，还有1-4%为61和146密码子突变，其中第12位密码子（月82%）是结直肠癌中最常见的突变位点。 可以扩展：　 注意： 描述重点： 可以扩展：　 注意： * 描述重点：好了，谢谢大家，我今天的介绍就到这里，再次感谢大家的宝贵时间，如果有进一步的兴趣的话，可以访问我们公司的网站，，获取更多、更详细的帮助信息! Ki-67 高压锅修复 Citrate Buffer pH6.0 不同修复方式比较比较 Ki-67 微波炉修复 Citrate Buffer pH6.0 * 不同pH值修复液的选择 pH6 A：CD20 B：Ki-67 C：HMB45 D: MOC31 pH8-9 * A 稳定型抗体：pH值改变对实验结 果影响不大 B “V”型抗体：强酸强碱修复液效果 好，但强酸条件下，细胞皱缩变形，影响 观察 C 上升型抗体：修复液pH值越高，效果 越好 D 下降型抗体：适用于酸性修复液 四种类型的抗体 * 操作步骤 第二步:抗原修复 酶消化：胃酶或胰酶工作液消化15-20分钟 注意：应根据室温及切片厚度适当调整酶消化的条件，当室温较低时可用37 ℃恒温箱做酶消化，切片较厚时需适当延长酶消化的时间 * 操作步骤 第三步:过氧化氢封闭 推荐：3%过氧化氢封闭10-15分钟 注意：过氧化氢最好现用现配，个别抗体封闭浓度有特殊要求，例：CD4要求用0.3%过氧化氢封闭 过氧化氢封闭后要用蒸馏水冲洗干净 * Blocking Endogenous Peroxidase Activity by H2O2 solution destroys CD4 3% H2O2 Solution 0.3% H2O2 Solution * 操作步骤 第四步:滴加一抗 推荐：一抗孵育4 ℃过夜，或室温孵育1.5小时 注意：滴加一抗前要将组织上多余的PBS甩干净，但是要避免干片 一抗必须将组织完全覆盖，避免边缘效应 切片及湿盒一定要放置水平，避免染色不均匀，孵育结束要充分冲洗切片 * 边缘效应 抗体覆盖不全，孵育过程中边缘变干所致 * 弱阳性 组织残留过多PBS，抗体被二次稀释 * 操作步骤 第五步:滴加检测系统 推荐：根据说明书推荐条件孵育，滴加注意事项同一抗 另外，检测系统的选择需要根据组织类型进行区分，如肝、肾等标本避免使用生物素检测系统；对于非常敏感的检测系统如Polymer，避免因孵育时间过长造成背景染色 * 操作步骤 第六步:显色 推荐：中杉DAB可以1.5ml左右加ABC各一滴，显色3-5分钟 注意：用浓度较低的DAB显色可以适当控制显色程度，有效避免显色过程中导致的背景染色 * 操作步骤 第七步:复染、封片 推荐：苏木素复染、梯度酒精脱水、二甲苯透明，封片 注意：脱水需彻底，否则影响观察 * EGFR HER-2 * ER CD117 * * * 描述重点：分子诊断技术主要是指以DNA分子作为诊断对象的临床诊断技术。一般来说，按原理来分，以四类技术为代表。即我们常常说的荧光原位杂交技术，也就是FISH技术。