cyclophilin a通过与caveolin1协同作用抑制raw细胞胆固醇蓄积word格式论文.docxVIP

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2018-05-18 发布于上海
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cyclophilin a通过与caveolin1协同作用抑制raw细胞胆固醇蓄积word格式论文.docx

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cyclophilin a通过与caveolin1协同作用抑制raw细胞胆固醇蓄积word格式论文

空转组减轻，尤以共转染CyclophilinA 和Caveolin-1 组减少更为明显；免疫共沉淀结果也说明Caveolin-1转染和CyclophilinA和Caveolin-1共转染的RAW264.7 细胞，CyclophilinA 和Caveolin-1 的相互作用增强；间接免疫荧光定位检测发现转染Caveolin-1 和共转染Cyclophilin A 和Caveolin-1 的RAW264.7 细胞中CyclophilinA 和Caveolin-1 在胞膜、胞浆中的表达均增强，以后者为甚。结论：1、将含CyclophilinA和Caveolin-1质粒共同导入RAW264.7细胞可增加CyclophilinA 和Caveolin-1 的结合。2、将含Caveolin-1质粒导入RAW264.7细胞可抑制ox-LDL诱导的胆固醇蓄积。3、将含CyclophilinA和Caveolin-1 质粒共同导入RAW264.7细胞可增强抑制ox-LDL诱导的胆固醇蓄积作用。关键词：CyclophilinA；Caveolin-1；真核表达载体；巨噬细胞；胆固醇CyclophilinAandcaveolin-1throughSynergisticeffectinhibitaccumulationofcholesterolinRAW264.7cellsABSTRACTObjective:Toconstruct anovel recombinanteukaryoticexpression vector pcDNA3.1-CyclophilinAandpReceiver-M02-Caveolin-1ofmouseCyclophilinA andCaveolin-1gene,andtoobservetheeffect ofCyclophilinAoncholesterol accumulation mediated byCaveolin-1 in RAW264.7 cells.Methods:TotalRNAwasextractedfrommousecellline.CyclophilinAand Caveolin-1geneswereclonedbyRT-PCRandthenwereligasedtovectorbyBamH I/KpnIandXhoIrestrictiveenzymesandDNAsequencingtest.CyclophilinAandCaveolin-1 genes weretransducted to RAW264.7 cells byEndoFectinTM-Plus method.WedetectedtheexpressionofCyclophilinAandCaveolin-1incellstransfectedwith reorganizedvectorusingRT-PCRandwesternblottingtodecidewhetherornotthe reorganizedeukaryoticexpressionvectorissuccessfullyconstructed.Then,the recombinant transfectedRAW264.7 cells weretreated with 100mg/Lox-LDLfor48h, andEnzymefluorescentanalysiswasperformedtodeterminethecontantofcellular totalcholesterolandfreecholesterol.OilRedODyeexperimentwasusedtoshow thelipiddropletsinox-LDLtreatedcells.Immunoprecipitationwasusedtoshowthe interactionofCyclophilinAandCaveolin-1.Immunofluorescencewereusedtodetect protein expression ofCyclophilin A and Caveolin-1.Results:TheidenticalDNAfragmentwasamplifiedfromtherecombinents.The productsofdoublerestrictionendonucleasesdigestanalysiswereCyclophilinAgene andCaveolin-1gene.DNAsequencingconfirmedthatpcDNA3.1-CyclophilinAand pReceiver-M02-Caveolin-1hadbeenconstructe