connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪声暴露的初步分析word格式论文.docxVIP

英文缩略词简表缩写ABR英文全称acousticbrainstemresponse中文对照听性脑干反应ROS TMX HTMXIRESacousticbrainstemresponse tamoxifen4-hydroxy-tamoxifeninternalribosomeentrysite活性氧簇他莫昔芬4-羟基-他莫昔芬内部核糖体插入位点EGFPenhancedgreenfluorescentprotein增强绿色荧光蛋白EPendocochlearpotential耳蜗内电势GJgapjunction缝隙连接中文摘要Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪声暴露的初步研究目的：为探索GJB2基因突变导致耳聋的机制及防治，我们拟建立Cx26基因敲除小鼠模型。同时初步探索慢性噪声暴露对某一发育阶段敲除Cx26的小鼠内耳的影响。方法：1.（1）条件诱导性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：应用PCR技术鉴定两种基因改建的小鼠Cx26loxP/loxP（C57/BL背景）和ROSA26Cre-ERT ，通过遗传学手段杂交建立Cx26条件诱导性基因敲除小鼠模型。这种小鼠是在Rosa26的基因位点插入了配体依赖Cre重组酶基因，人工合成的雌激素拮抗剂tamoxifen（TMX）能够激活Cre表达。从而切除GJB2基因位点上被loxp序列锚定的片段(2)条件性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：使用PCR技术鉴定出Cx26LoxP/LoxP小鼠（CD1背景）与Pax2·Cre小鼠，Cre随Pax2 的表达于特定组织中表达，根据遗传学定律两者杂交，F2代获得条件性Cx26基因敲除小鼠（Cx26-/-；Pax2·Cre）。2.慢性噪声暴露：Cx26loxP/loxP;Rosa26CreERT小鼠在出生第15天腹腔注射TMX3mg/10g体重，小鼠出生第21天，每日暴露于100dBSPL稳态白噪声，每天8小时，连续暴露5天。听性脑干反应检测小鼠听阈，耳蜗基底膜铺片观察毛细胞情况。结果：基因分型结果显示我们通过遗传学手段将两种基因改建小鼠杂交，获得了Cx26条件诱导性基因敲除小鼠Cx26loxP/loxP;Rosa26CreERT和条件性Cx26loxP/loxP；Pax2·Cre基因敲除小鼠。TMX注射组慢性噪声暴露后底回毛细胞损伤较单纯噪声组严重，差异有显著性。结论：我们在本实验室中建立了两种Cx26基因敲除小鼠模型。1）时间诱导性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型可以在耳蜗发育、内淋巴电位产生和听力形成的各个时期敲除Cx26基因。2）条件性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型中小鼠耳蜗部分Cx26已被敲除。降低Cx26的表达增加噪声对内耳的损伤。关键词：连接蛋白26；基因敲除小鼠；遗传性耳聋；基因分型听力损伤AbstractGenerationsofconnexin26nulltransgenicmousemodelsandpreliminarystudyofchronicnoiseexposureObjective:Inthisstudy,weaimedtogeneratetwocCx26nullmousemodels.andtoexplorehowthechronicnoiseexposureinfluencethecochleafunction afterknockdowntheCx26atdevelopmentstage.Methods:1.(1) TogenerateconditionalinducibleCx26nulltransgenicmousemodels：WebackcrossedthetransgenicmouseCx26loxP/loxPwithaC57/BLgeneticbackgroundwithROSA26Cre-ERTtransgenicmouse,basedonlawofinheritance,wegenerateCx26loxP/loxPROSA26Cre-ERTtransgenicmouseinF2.Ligand-dependentCregenesequencewasinsertedintotheROSApromoter.Therefore,onlyexposuretotamoxifenwillinduceCreexpression.(2)Togenerateconditionalconnexin26（Cx26）nulloftransgenicmousemodels：webackcrossedthetransgenicmouseCx26loxP/loxPwithaCD1geneticbackgroundwithPax2·Cretransgenicmouse,thatgenerateCx26-/-Pax