crylab蛋白在转基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽间传递路径word格式论文.docxVIP

3.3 褐飞虱卵内容物免疫荧光切片153.4 褐飞虱卵、卵壳及初孵若虫体内CrylAb 蛋白的测定163.5 不同日龄褐飞虱卵的Cry1Ab 蛋白的含量174 讨论17第二章水稻汁液CrylAb 蛋白来源验证191 实验材料192 试验方法192.1 水稻苗吐水水珠的CrylAb 蛋白浓度测定192.2 染色法验证192.3 直接取食水稻的验证203 实验结果与分析203.1 Bt稻苗吐水水珠CrylAb 蛋白浓度测定203.2 染色法验证213.3 黑肩绿盲蝽直接取食验证214 讨论22第三章褐飞虱蜜露检测231 试验材料232 试验方法232.1 褐飞虱蜜露中Cry1Ab蛋白的浓度测定232.2 褐飞虱蜜露喂养的黑肩绿盲蝽体内Cry1Ab 蛋白的含量233 结果与分析233.1 褐飞虱蜜露测定233.2 蜜露喂养的黑肩绿盲蝽体内CrylAb 蛋白测定244 讨论24第四章综合传递途径261 试验材料262 试验方法262.1 黑肩绿盲蝽初孵若虫及被捕食褐飞虱卵的Cry1Ab 蛋白含量262.2 黑肩绿盲蝽4 龄若虫及被捕食褐飞虱卵Cry1Ab 蛋白含量测定262.3 黑肩绿盲蝽成虫及被捕食的褐飞虱卵Cry1Ab 蛋白含量测定263 结果与分析274 讨论27第五章总讨论291 结果与讨论292 本研究特色及创新点303 不足之处及今后研究方向30附件:31参考文献:34致谢45CrylAb 蛋白在转基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽间的传递路径摘要刺吸式非靶标昆虫作为农业生态系统中一个重要的类群，能否摄入Bt毒蛋白目前仍然存在争议。有关研究表明，刺吸式昆虫可以摄入Bt毒蛋白，但通过何种途径和方式摄入尚不清楚。本研究以转Bt基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽构成的非靶标食物链为系统，旨在研究转Bt基因克螟稻表达的Cry1Ab蛋白在非靶标食物链中的传递途径。研究结果如下：1）褐飞虱卵：用电镜扫描褐飞虱卵表面结构，发现褐飞虱的卵帽处有排列整齐的孔洞，而卵帽以下部分表面光滑。褐飞虱卵壳表面免疫荧光和卵内容物冷冻切片定位显示，在转Bt基因克螟稻稻苗饲养的褐飞虱卵帽处和卵内容物内均含有CrylAb蛋白，非转基因水稻秀水11品系上的褐飞虱卵没有出现荧光反应，说明该褐飞虱卵不含CrylAb 蛋白。分别检测等量的褐飞虱6日龄卵、卵壳及其初孵若虫，结果表明CrylAb主要在其卵壳上，初孵若虫没有检测到。分别检测转Bt基因稻苗饲养的不同日龄褐飞虱卵，发现它们均含有CrylAb蛋白，但并没有随卵龄增加而出现CrylAb蛋白富集的现象。2）稻苗及其吐水：通过分别检测克螟稻苗和秀水11稻苗的吐水水珠，发现转Bt 基因的克螟稻苗吐水汁液内含有CrylAb蛋白，而秀水11稻苗吐水汁液内则没有。将黑肩绿盲蝽的成虫和若虫分别放在用亚甲基蓝染色后的转Bt基因稻苗上饲养，解剖发现该黑肩绿盲蝽若虫的中肠可被亚甲基蓝染色，其成虫中肠则没有染色。同时发现，在只提供转Bt稻苗饲养时，该黑肩绿盲蝽若虫体内可以检测到CrylAb蛋白，而其成虫体内则没有检测到。因此说明，黑肩绿盲蝽若虫可直接通过刺吸取食Bt稻苗摄入CrylAb蛋白。3）褐飞虱蜜露：分别收集克螟稻和秀水11稻苗饲养的褐飞虱的蜜露，在克螟稻苗上饲养的褐飞虱蜜露内含有高浓度的CrylAb蛋白，秀水11饲养的褐飞虱蜜露没有检测到；研究观察在水稻苗、褐飞虱同时存在的条件下，黑肩绿盲蝽有取食褐飞虱蜜露的现象，但仅单独用褐飞虱蜜露喂养的黑肩绿盲蝽，其成虫和若虫体内均没有检测到CrylAb 蛋白。4）综合传递途径：应用ELISA分别检测克螟稻上的褐飞虱卵及黑肩绿盲蝽的成虫、初孵若虫、4龄若虫体内的CrylAb蛋白，结果表明：3种不同虫态的黑肩绿盲蝽体内都可检测到CrylAb蛋白，其含量可随着龄期的增长而降低，而且初孵若虫体内的含量与4龄若虫和成虫的含量相比差异极显著。然而，同时检测克螟稻上与被黑肩绿盲蝽吸食的等量的饱满褐飞虱卵，其CrylAb蛋白含量低于最低检测值。说明不同发育时期的黑肩绿盲蝽除吸食褐飞虱卵外，还能摄入稻汁或褐飞虱蜜露，因此它们体内的CrylAb 毒蛋白来源为多条综合途径。结论：在本实验室内条件下，黑肩绿盲蝽可以通过直接刺吸取食转Bt基因水稻汁液、褐飞虱卵及其分泌的蜜露等多条途径摄入CrylAb蛋白，而且该黑肩绿盲蝽的不同虫态摄入途径也存在一定差异，若虫具有兼性取食水稻的习性。关键词：转基因水稻；CrylAb蛋白；褐飞虱；黑肩绿盲蝽；传递途径PathwayofCrylAbproteininthefoodchainfromBtricethroughNilaparvatalugenstoCyrtorhinuslividipennisAbstractOneofthemaindebatesoftheuseofBttran