bfgf vegf对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化影响的研究word格式论文.docxVIP

bFGF、VEGF 对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化影响的研究专业：骨外科学研究生：史学形导师：李青摘要：目的：通过制备大鼠脊髓损伤模型，探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）联合移植对内源性神经干细胞（ENSCs）是否具有促增殖及向神经元分化的作用。方法：将成年Wistar大鼠56只，随机分成四组：A组，生理盐水组（n=14）；B组，bFGF组（n=14）；C组，VEGF组（n=14）；D组，bFGF、VEGF组（n=14）。利用Allen法制备大鼠脊髓损伤模型，损伤后立即分别给予生理盐水、bFGF、VEGF、bFGF和VEGF。分别在术后12小时、7天、21 天利用BBB评分系统监测大鼠运动功能的恢复；并在术后21天取材，处死前24小时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu），取损伤部位近远端各5mm脊髓组织，行HE染色，免疫组织化学法检测Brdu、巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达情况。结果：损伤后21天，bFGF、VEGF合用治疗组BBB高于其他三组，差异具有统计学意义(p＜0.05)；损伤后21天HE染色示：bFGF、VEGF治疗组组织形态学基本接近正常脊髓组织；免疫组织化学结果：损伤后21天时， bFGF、VEGF治疗组，神经干细胞数量和神经元数量明显高于其他组（p﹤0.05）。结论：联合移植外源性bFGF、VEGF对ENSCs的增殖和向神经元方向分化具有促进作用，且二者可能具有协同作用。关键词:大鼠脊髓损伤内源性神经干细胞碱性成纤维细胞生长因子血管内皮生长因子增殖分化前言脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)是一种严重影响人们日常生活和健康的疾病。随着社会的发展，机械化程度的提高，高能量创伤越来越多，脊髓损伤也呈现高发生率、高致残率等特点，并且多见于青壮年劳动力，给家庭和社会造成了沉重的负担。脊髓损伤后主要表现为损伤平面以下肢体的感觉、运动障碍等一系列相应的体征。由于目前，人们对脊髓损伤后的神经再生修复机制认识还远远不够，所以，脊髓损伤后的神经再生修复研究一直都是神经科学领域的热点课题之一。近年来，利用动物脊髓组织中的内源性神经干细胞(endogenousneuralstem cellsENSCs)增殖及向神经元方向分化治疗脊髓损伤，已成为研究的热点。内源性神经干细胞是指具有自我更新能力，并可增殖分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的一类组织干细胞。成年哺乳动物大脑中内源性神经干细胞广泛分布于大脑室下带（sub-ventricular，SVZ）、吻侧迁移流、间脑、海马、纹状体、室下核、海马颗粒下层和其他脑区[1]，以及脊髓紧靠近中央管的室管膜与室管膜下区和白质实质【2】，特别是腰骶髓节段提供的这种多能细胞数量最多。内源性神经干细胞治疗脊髓损伤有其明显的特点和优势：无道德伦理学方面问题；无免疫源性，不需抗排异治疗；同样具备自我更新和多向分化的能力；无生物安全性问题；操作简便等。因此，激活体内ENSC使其增殖并分化为神经元是治疗脊髓损伤的一个很好的选择。正常情况下，内源性神经干细胞增殖非常有限，只有当脊髓损伤时，其才会被激活并大量反应性增生，且向不同的方向分化【3】。由于内源性神经干细胞具有在不同的环境中可增殖、分化为不同类型的成熟组织细胞的特性。因此，当脊髓损伤后内环境的改变，小胶质细胞激活、星形胶质细胞增殖形成的瘢痕【4】以及相关轴突生长抑制因子生成，导致增生的内源性神经干细胞的数量较少且大多分化为星形胶质细胞。这是目前内源性神经干细胞治疗脊髓损伤所面临的最突出的问题。因此，如何诱导内源性神经干细胞大量增生及分化为神经元是我们研究的重点。虽然近来也有不少研究通过给予不同的神经营养因子、药物、物理治疗的方法促进ENSC增殖取得了一定的成功，但仍存在很多问题期待我们去解决，如缺少既促增殖又促分化的药物或神经营养因子，并且很多药物及神经因子都存在作用时间的现象。碱性成纤维生长因子缓释微球和血管内皮生长因子缓释微球联合移植可以提供一个新的方向。碱性成纤维细胞生长因子是目前研究较多且成熟的具有促进内源性神经干细胞增殖作用的神经营养因子。它具有155 个氨基酸的阴离子多肽，包括9 个配基，等电点为9.6，属碱性，对热和酸敏感，易被蛋白降解，广泛分布于成熟和未成熟的中枢神经系统内的神经元、胶质细胞、成纤维细胞和内皮细胞等多种细胞中，又是重要的致有丝分裂原，参与细胞的生长发育和组织损伤的修复。bFGF 与其受体结合后可通过多条信号转导通路将信号传入细胞核内，参与调节靶细胞的很多反应如：细胞的生长、增殖、分化、存活和恶性转化。它是一种作用非常广泛的细胞因子，是成纤维细胞生长因子家族的一员【5】，具有促进多种来自神经外胚层和中胚层的细胞生长、增