bfgf bmp2基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的体外实验分析word格式论文.docxVIP

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2018-05-18 发布于上海
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bfgf bmp2基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的体外实验分析word格式论文.docx

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bfgf bmp2基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的体外实验分析word格式论文

中英文缩略词对照表英文缩写英文全名中文译名AAVAdenoAssociatedVirus腺相关病毒载体AVAdenovirus腺病毒载体BMP-2BoneMorphogenetic Protein2骨形态发生蛋白2BMSCsBoneMarrow mesenchymalStem Cells骨髓间充质干细胞bFGFbasicFibroblastGrowthFactor碱性成纤维细胞生长因子bpBasepair碱基对cDNAComplementaryDeoxyribonucleicAcid互补DNADNADeoxyribonucleicacid去氧核糖核酸DMEM/F12DulbeccosModifiedEagleMedia: Nutrient MixtureF-12DMEM/F12培养基E.coliEscherichiacoli大肠杆菌OCOsteocalcin骨钙素蛋白OPNOsteopontin骨桥蛋白PCRPolymerase chainreaction聚合酶链反应RT-PCRReal-timeFluorescent PolymeraseChainReaction实时荧光定量PCR目录摘要…………………………………………………………………………………1ABSTRACT……………………………………………………………………… 2前言…………………………………………………………………………………4内容与方法…………………………………………………………………………61. 实验材料及仪器…………………………………………………………62. 实验内容…………………………………………………………………112.1羊的骨髓间充质干细胞的培养………………………………………112.2慢病毒载体构建………………………………………………………132.3慢病毒感染羊BMSC及鉴定…………………………………………182.4成骨相关基因表达的检测…………………………………………… 223.质量控制…………………………………………………………………244.统计方法……………………………………………………………………245.技术路线……………………………………………………………………25结果…………………………………………………………………………………26讨论…………………………………………………………………………………38小结…………………………………………………………………………………44致谢…………………………………………………………………………………45参考文献……………………………………………………………………………46综述…………………………………………………………………………………52攻读硕士学位期间发表的学位论文………………………………………………58导师评阅表…………………………………………………………………………59bFGF、BMP-2基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的体外实验研究研究生：韩祥祯导师：何惠宇教授/主任医师摘要目的：分析bFGF和BMP-2基因单独和联合转染对体外培养的羊BMSCs的增殖和骨向分化的影响，比较Collagen-Ⅰ、OC、OPN 等成骨相关基因于转染前后相对表达量的差别，为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。方法：全骨髓培养法培养羊BMSCs，构建bFGF、BMP-2慢病毒载体，分别转染羊BMSCs，流式细胞仪检测转染率，将得到bFGF组、BMP-2 组、联合组，对照组细胞，提取RNA后使用实时定量PCR和Western-blot检测Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相关基因的mRNA 水平和蛋白水平相对表达量的变化。结果：（1）慢病毒载体转染的BMSCs 的转染率达95.4%，且bFGF和BMP-2均稳定表达。（2）mRNA水平上，在Collagen-Ⅰ和OC基因，bFGF主效应、BMP-2主效应、交互效应均有统计学意义（P﹤0.05）。bFGF 和BMP-2 均能促进BMSCs 的两基因高表达，且bFGF与BMP-2间存在协同作用。联合基因转染时Collagen-Ⅰ和OC基因表达高于单一基因转染。但在OPN基因，bFGF 主效应无统计学意义（P﹥0.05）。多元析因显示，bFGF和BMP-2两因子均能增高成骨相关基因mRNA 表达且存在协同的交互作用（P﹤0.05）。（3）蛋白水平上，在Collagen-Ⅰ、OC 和OPN蛋白，bFGF主效应、BMP-2 主效应、交互效应均有统计学意义（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2 均能促进BMSCs 的三个成骨相关基因蛋白高表达，且bFGF与BMP-2 间分别存在协同作用。联合基因转染时Collagen-Ⅰ和OC 蛋白表达高于单一基因转染。多元析因显示，