bfa协同增强顺铂抗肿瘤作用及分子机制word格式论文.docx

FBSfetal bovineserum胎牛血清GRP78glucose regulated protein 78kDa葡萄糖调节蛋白78HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶GRP94heat shock protein 90kDa beta热激蛋白90B1Mmol/L摩尔每升mlmilliliter毫升MTTmethylthiazolldiphenyl-tetrazoliumbromide噻唑蓝ODoptical density吸亮度PBSphosphate buffered saline磷酸盐缓冲液PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应PERKPKR-like ER kinase蛋白激酶样内质网应激酶PMSFphenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟q-RT-PCRquantitativereal-time polymerasechain荧光实时定量聚合酶链式反应RNAreaction ribonucleotide核糖核酸rpmrounds perminute转每分钟RIPAradioimmuno precipitation assay buffer放射免疫沉淀分析缓冲液IRE1inositol requiringenzymel 1肌醇激酶1SDSsodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠TBETris/Borate/EDTATris-硼酸缓冲液TBSTris-Buffered SalineTris-HCl 缓冲盐溶液TEMEDN,N,N′,N′-tetramethylethylenediamineN,N,N′,N′-四甲基乙二胺TrisTris(hydroxymethyl)aminomethane三（羟甲基）氨基甲烷XBP1X-boxbinding protein1X-盒-结合蛋白1β-actinbeta-actinβ-肌动蛋白BAF协同增强顺铂抗肿瘤的作用及分子机制中文摘要目的：探究BFA与顺铂体外抗人肺癌和人卵巢癌的协同作用及分子机制。方法：将人肺癌细胞（GLC-82）和人卵巢癌细胞（SK-OV-3）分别分为对照组、BFA组、CDDP组、BFA+CDDP组。对各组进行以下实验：（1）MTT法测定BFA 和CDDP单独及联合处理对人肺癌细胞株GLC-82和人卵巢癌细胞株SK-OV-3生长抑制率；（2）药物联合作用指数（CI）、药物剂量降低指数（DRI）和等效图解法分析两药物之间药效学的相互作用；（3）倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；（4）DAPI 染色，荧光显微镜观察细胞核变化；（5）AnnexinV-FITC/PI双染，流式细胞术检测细胞凋亡；（6）JC-1 染色，流式细胞术检测线粒体膜电位变化；（7）实时荧光定量PCR（q-RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Westernblot）检测线粒体凋亡通路、内质网应激标志分子GRP78、GRP94、CHOP及PERK-ATF4通路、IRE1α-XBP1 通路、ATF6 通路相关基因及Caspase3 的表达。结果：（1）MTT结果表明，BFA和CDDP处理GLC-82 细胞和SK-OV-3 细胞24h 时，对细胞的生长均具有显著的抑制作用，且呈剂量性依赖，GLC-82细胞的IC50分别为100ng/ml 和4μg/ml，SK-OV-3 细胞的IC50 分别为450ng/ml和9μg/ml；且BFA和CDDP联合处理各浓度组合CI 值绝大多数小于1，DRI 值均大于1，其剂量比例点绝大多数位于等效线下方。（2）细胞形态学观察：药物处理24 h 后，BFA处理组细胞皱缩、变圆，CDDP 处理组细胞形态无明显变化但有少量凋亡细胞，BFA+CDDP 处理组较单独用药组细胞皱缩、变圆加剧且凋亡细胞增多；药物处理48h 后较24h 细胞形态的异常变化进一步加剧。（3）DAPI染色观察：药物处理24h 后，对照组细胞核完整染色均匀，BFA 处理组和CDDP处理组细胞核固缩且呈致密浓染，BFA+CDDP处理组与单独用药组无明显差异；药物处理48 h 后，较24 h 细胞形态变化进一步加剧，但BFA+CDDP 处理组呈致密浓染细胞核数量及核裂解碎片显著增多。（4）流式细胞术检测凋亡：BFA+CDDP 处理GLC-82 细胞凋亡率为（14.1±2.3）%，显著高于BFA处理组（P0.01）、CDDP处理组（P0.01）及对照组（P0.01）；BFA+CDDP处理SK-OV-3细胞凋亡率为（17.0±1.3）%，显著高于BFA处理组（P0.01）、CDDP处理组（P0.01）及对照组（P0.01）。（5）流式细胞术检测线粒体膜电位：BFA+CDDP处理GLC-82细胞线粒体膜电位下降率为（28.