bfgfvegf复合肽的免疫应答以及抑瘤作用分析word格式论文.docxVIP

tumor cells within theirbodies.Conclusion:TheresultsrevealedthatVBP3caninhibitangiogenesisand preventimmuneescape.VBP3canalsoeffectivelyinhibittheproliferationofLL-2 cells’growthinvivoandinvitroandcanpossiblybeusedasavaccinefortumor therapy.Key words:bFGF;VEGF; complexpeptide; angiogenesis; proliferationinhibition; phosphorylation; tumor目录第一部分前言1 1.bFGF和VEGF与肿瘤生长之间的关系12.bFGF 和VEGF 下游信号通路中的磷酸化作用23. 免疫逃逸机制24. 多肽疫苗抗肿瘤前景35.VBP3 多肽制备与抑制肿瘤生长相关作用的意义4技术路线5第二部分VBP3 免疫小鼠后免疫应答作用及对血管新生抑制作用研究61 材料与方法61.1实验材料61.2 实验方法92 结果与分析122.1VBP3工程菌的表达纯化鉴定122.2 抗VEGF和bFGF 多克隆抗体的效价及特异性测定132.3VBP3 免疫小鼠后的免疫应答作用分析132.4 纯化的VBP3 抗体对HUVEC 细胞增殖抑制作用162.5VBP3 抗体对HUVEC细胞迁移抑制以及成管作用分析173讨论20第三部分VBP3 肽抑瘤作用研究221 材料与方法221.1 实验材料221.2 实验方法232 结果与分析272.1VBP3 抗体对人卵巢癌细胞SKOV-3的增殖抑制及磷酸化作用分析272.2VBP3 抗体对肺癌细胞LL-2的增殖抑制及磷酸化作用分析282.3VBP3 对C57BL/6J 小鼠LL-2肿瘤模型研究分析313讨论38第四部分小结与展望401 小结402 展望40参考文献42英文缩略词表46在读期间学术交流与发表论文47致谢48第一部分前言1. bFGF和VEGF与肿瘤生长之间的关系碱性成纤维生长因子（bFGF）和血管内表皮生长因子（VEGF）是最重要的肿瘤血管新生因子，在肿瘤血管新生，促进肿瘤的转移中具有协同作用，bFGF 抗体和VEGF抗体在体内均可抑制肿瘤的生长[1]。bFGF和VEGF还可以促进血管内皮细胞的定向分化，他们还会通过促进PDGF-B-PDGFβ信号来共同促进肿瘤的生长。抑制肿瘤高表达的bFGF 和VEGF对抑制肿瘤的生长和转移具有重要的作用。抗VEGF的抗体药物贝伐单抗(Avastin)在临床应用上显示出了较好的效果并且获得了一定的经济效应，但是长期过度使用该抗体就可能会带来一些副作用，比如会代偿性的使PDGF和bFGF的表达升高而导致耐药，从而不能有效的治疗抑制肿瘤[2]。bFGF对血管内皮细胞有明显的促增殖作用，而且对肿瘤的增殖和转移具有重要作用[3]。有一些肿瘤（如肺癌、乳腺癌、结肠癌、食道癌等）出现bFGF的高表达[4-7]，其主要的作用机制是在机体组织发生癌变时，肿瘤细胞可以通过自分泌和旁分泌bFGF，促进血管内皮细胞增殖并向肿瘤组织运动，从而促进肿瘤毛细血管的形成[8]，为肿瘤生长提供氧和营养物质。bFGF也是人黑色素瘤细胞中的一个组成性表达的细胞因子[9]。Rodeck等检测到bFGF、TGF-α、TGF-β、PDGF-A、PDGF-B、melanoma growth-stimulatingactivity(MGSA)等细胞因子的mRNA在黑色素瘤细胞系中均可以稳定转录，但是在正常生成黑色素的细胞中却没有检测到。每个细胞系的生长因子表达模式都有自己特异的方式，但在所有的细胞系中，检测到bFGF均有表达，bFGF 表达的广谱性说明了bFGF对黑色素瘤生长的重要性。bFGF与其受体FGFR1 靶向结合能诱导黑色素瘤细胞凋亡，从而去抑制肿瘤生长[10]。VEGF是重要的血管新生因子，而且对于恶性肿瘤来说，从病理学和生理学上角度来说都是最初的调节者[11]。在30-40%非小细胞癌中VEGF都出现了高表达和具有促进血管新生的作用[12]。肿瘤细胞可以上调VEGF和它受体的表达从而刺激肿瘤的血管新生[13-14]。肿瘤的生长需要血液供应养分，而且会要求形成新的血管，内皮细胞生长因子在血管新生中起到了重要的作用。在许多的疾病中，例如：眼部血管新生疾病，慢性炎症疾病和一些癌症都直接或者间接的受不受控制的血管新生所影响[15]。VEGF与乳腺癌