bde209对体外培养神经干细胞增殖分化及凋亡影响word格式论文.docxVIP

【材料与方法】1.购买新生1天SD大鼠，取大鼠海马组织进行体外神经干细胞培养。2.培养3-4代后海马神经干细胞进行神经干细胞鉴定及纯度鉴别。3.传代培养3-4代的新生鼠海马神经干细胞吹打成单细胞悬液后，暴露于BDE-209，实验共分5组，空白对照组，DMSO对照组，实验A组：BDE-209浓度为10ug/ml,实验B组：BDE-209浓度为30ug/ml,实验C组：BDE-209浓度为50ug/ml。每组设3个平行样。DMSO对照组加入含1‰DMSO的培养液。4.染毒72h后，在倒置显微镜下进行神经球形态观察，利用美国Image-Pro-Plus 6.0图象分析软件记数形成神经球的数目，测量神经球的平均直径。【结果】1. 神经干细胞鉴定结果：海马组织培养经3-5天可见神经球形成,6-7后见神经球逐渐增大，经免疫细胞化学染色证实新形成的神经球呈现Nestin免疫染色阳性，提示所分离培养的细胞是神经干细胞。2. 海马神经干细胞培养3-4代后在倒置显微镜下观察，由数十到数百个细胞聚集形成大小不等的神经球，折光性强，周围光晕明显，吹打成单细胞悬液后行免疫细胞化学法鉴定神经干细胞的纯度。由结果可见分散的神经干细胞是主体, 可占90%以上。3．利用美国Image-Pro-Plus6.0图象分析软件记数形成神经球的数目，测量神经球的平均直径可见：实验组可见神经球数目明显减少，且神经球平均直径明显减小，随着BDE-209浓度加大, 神经球数目减少，平均直径减小。【结论】以上提示：所分离培养的细胞形成悬浮生长的神经球，经免疫细胞化学鉴定是神经干细胞。BDE-209可以导致新生鼠海马细胞形成神经球数目及直径改变，随BDE-209浓度增加形成神经球数目及直径有不同程度的下降。【关键词】BDE-209; 神经干细胞; 神经球；第二部分BDE-209对体外培养新生鼠海马神经干细胞增殖的影响【目的】检测BDE-209对体外培养新生鼠神经干细胞增殖的影响【材料与方法】1.传代培养3-4代的新生鼠海马神经干细胞暴露于BDE-209，实验共分5组，空白对照组，DMSO对照组，实验A组：BDE-209浓度为10ug/ml,实验B组：BDE-209 浓度为30ug/ml,实验C组：BDE-209浓度为50ug/ml。每组设3个平行样。DMSO 对照组加入含1‰DMSO的培养液。2.经MTT细胞增殖检测法，分别于24，48，72，96，120小时测定吸光度值3.绘制细胞生长曲线.对A值进行统计学分析. 【结果】MTT结果显示细胞生长总趋势上升,随着BDE-209作用剂量的增加，增殖能力下降，经相关分析可见海马神经干细胞增殖能力与一定程度的BDE-209暴露剂量成负相关。【结论】无血清培养基分离培养的新生鼠海马组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力，BDE-209可以导致神经干细胞增殖能力发生改变，随BDE-209浓度增加神经干细胞增殖能力有不同程度的下降,这可能是BDE-209神经毒性的作用机制之一。【关键词】BDE-209；神经干细胞；增殖能力第三部分BDE-209对体外培养新生鼠海马神经干细胞分化的研究【目的】探讨十溴联苯醚(BDE-209)对体外培养新生鼠海马神经干细胞分化的影响【材料与方法】1.传代培养3-4代的新生鼠海马神经干细胞，在含血清培养基中培养，并暴露于BDE-209，实验共分5组，空白对照组，DMSO对照组，实验A组：BDE-209浓度为10ug/ml,实验B组：BDE-209浓度为30ug/ml,实验C组：BDE-209浓度为50ug/ml。每组设3个平行样。DMSO对照组加入含1‰DMSO的培养液。隔天半量换液。2.7天后进行免疫荧光检测，并运用美国Image-Pro-Plus6.0图象分析软件记数NF阳性,GFAP阳性,DAPI阳性细胞数目,计算NF+/DAPI+，GFAP+/DAPI+比例，并测量NF+细胞突起长度。【结果】NF+细胞比例及NF+细胞突起长度随着BDE-209浓度的增加而减少，GFAP+细胞比例随着BDE-209浓度的增加而增加，存在剂量依赖关系. 【结论】BDE-209可以导致神经干细胞分化成神经元的比例发生改变，随BDE-209浓度增加神经干细胞分化成神经元的比例有不同程度的下降，分化成神经元的突起长度也有不同程度的下降。【关键词】BDE-209; 神经干细胞; 分化第四部分BDE-209对体外培养新生鼠海马神经干细胞凋亡的研究【目的】观察BDE-209对海马神经干细胞凋亡的影响。【材料与方法】1.传代培养3-4代的新生鼠海马神经干细胞暴露于BDE-209，实验共分5组，空白对照组，DMSO对照组，实验A组：BDE-209浓度为10ug/ml, 实验B组：BDE-209 浓度为30ug/ml, 实验C组：BDE-209浓