bdnftrkb对人类多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226表达和分泌vegf的调控作用word格式论文.docxVIP

前言多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）是骨髓内异常浆细胞恶性克隆增殖性疾病，约占全部恶性肿瘤的1%，约占造血系统恶性肿瘤的10%，是血液系统的第二大常见恶性肿瘤。其主要特征是骨髓中出现恶变浆细胞、血和尿中有单克隆免疫球蛋白以及广泛的骨质疏松或溶骨性改变。尽管MM 的基础和临床研究在近年来取得了长足进展，但迄今为止MM仍然是无法根治的恶性疾病。深入探讨MM发生发展的内在机制，进行特异性、靶向性治疗是临床工作面临的挑战和亟待解决的问题。近年来研究发现MM细胞与骨髓微环境的相互作用在MM的发病机制中起核心作用，多方面的证据已表明血管新生在MM 的发生发展过程中起重要作用。实验室和临床前期研究表明MM患者骨髓微血管密度（microvesseldensity，MVD）明显高于骨质疏松症，而且小动脉及毛细血管数量多少与MM 严重程度及分期呈正相关[1]。观察新近诊断的MM患者，其MVD低者的缓解率、无病生存期和总体生存率均明显延长[2]。骨髓瘤细胞本身可直接分泌多种作用于血管内皮细胞的促血管新生因子，包括血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblastgrowthfactor，bFGF）、促血管生成蛋白（angiopoietin-1，Ang-1）等，在骨髓瘤血管新生中起着重要作用[3,4]，但骨髓瘤细胞的促血管新生作用和骨髓瘤诱导血管新生的生物学作用机制尚未完全阐明。脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是神经营养因子家族中的重要一员，最初发现表达于中枢神经元细胞，对中枢和周围神经系统多种类型神经元的生长、发育、分化和再生具有重要作用。随着研究的深入，人们发现许多非神经组织中也有BDNF的表达[5,6]，有迹象表明BDNF对于血管新生具有重要作用。资料显示人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC）、人脑血管内皮细胞（humancerebralendothelialcells，HCEC）等多种内皮细胞以及新生血管平滑肌细胞均能产生BDNF并有其受体TrkB的存在，并且发现BDNF对血管内皮细胞的生长发育起着重要的支持作用[6,7,8,9]。新近研究表明BDNF 还可以通过其受体TrkB激活NF-κB[41]，NF-κB蛋白及其调节表达的多种基因产物（VEGF、IL-6、TNF、MMP-9、IL-8 等）与细胞的增殖、凋亡抑制、侵袭、血管新生和转移密切相关，因此我们推测BDNF可能在一定程度上参与了机体新生血管的形成。本课题前期研究发现MM中存在着BDNF异常高表达，而且MM患者血浆标本中BDNF表达水平与VEGF 表达水平间存在着相关性。基因芯片分析表明转染BDNF酪氨酸激酶受体TrkB后，神经母细胞瘤细胞株SY5Y中促血管新生因子VEGF表达明显上调；VEGF可能为TrkB的靶基因之一[10]。因此我们推测，BDNF可能正是调节VEGF等促血管新生因子表达的特异性上游信号分子，通过激活TrkB酪氨酸激酶受体及其下游的信号级联包括NF-κB参与调控VEGF、IL-6 等多种促血管新生因子的表达。受上述研究结果和本实验室既往工作的启示，本课题选用了经过建系和鉴定过的人类多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226 细胞作为研究对象，其生物学特征可代表骨髓瘤的生物学特征。研究初步探讨了外源性及内源性BDNF/TrkB信号通路对促血管新生因子VEGF的调控作用，为BDNF参与MM血管新生及对其他促血管新生因子的调控作用提供理论依据，以期为特异性、靶向性治疗MM 寻找新的突破口。研究分两个方面的工作进行：（1）探讨外源性BDNF对RPMI8226 细胞表达及分泌VEGF的上调作用；（2）进一步研究阻断内源性BDNF/TrkB信号通路可下调VEGF的表达。参考文献LarocheM,BroussetP,LudotI,etal.Increasedvascularizationinmyeloma.EurJ Haematol, 2001,66:89-93.MunshiNC,Wilson C.Increasedbonemarrow microvesseldensityinnewlydiagnosed multiple myeloma carriesapoorprognosis. Oncol,2001,28:565-569.JaboinJ,KimCJ,KaplanDR,etal.Brain-derivedneurotrophicfactoractivationof TrkBprotectsneuroblastomacellsfromche