2010.3.12Ch2.生物大分子的制备.pptVIP

在真空状态下，置于冻干机的冰冻抽提液可以由固体直接变为气体。 六、冷冻干燥法 可以防止理化及生物特性的改变； 由于是由冰冻状态直接升华为汽态，所以样品不 起泡，不暴沸。 对于易氧化的物质具有很好的保护作用。 制品经过冻干后水份含量非常低，使制品的稳定 性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输 还延长了制品保存期限。 * 第六节 样品的保存 空气：潮解、微生物污染和自动氧化。 温度：通常大多数样品都是低温保存，以抑制氧化、水解等化学反应和微生物的生成。 水份：包括样品本身所带的水份和由空气中吸收的水份，会加速氧化、聚合、离解和霉变。 光线：通常都要避光保存。 pH：保存液态样品时注意其稳定的pH范围 时间：生化和分子生物学样品不可能永久存活 影响生物大分子样品保存的主要因素有： * * 理化性质 分离及纯化方法 分子大小和形态 差速离心、超滤、分子筛、透析 溶解度 盐析、萃取、分配层析、结晶 电荷差异 电泳、等电聚焦电泳、离子交换层析 生物功能专一性 亲和层析 生物大分子的理化性质 与分离纯化方法的选择 制备方法的选择 以生物大分子的理化性质为依据 理化性质不同，所选用的分离提纯方法也不相同 第七节 分离纯化方法的选择 早期分离纯化特点： ①粗提取液中物质成份十分复杂。 ②欲制备的生物大分子浓度很稀。 ③物理化学性质相近的物质很多。 ④希望能除去大部分与目的产物物理化学性质差异大的杂质。 在分离纯化流程中， 前期和后期的方法选择有所不同： * 对所选方法的要求： ①要快速、粗放。 ②能较大地缩小体积 ③分辨力不必太高。 可选用的方法： 吸附； 萃取； 沉淀法（热变性、盐析、有机溶剂沉淀等）； 离子交换（批量吸附、胖柱交换）； 亲和层析等。 * 可选用的方法：吸附层析、盐析、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析、等电聚焦制备电泳、制备HPLC等。 纯化步骤前后要有科学的安排和衔接，尽可能减少工序，提高效率。 ⑵晚期分离纯化 * 应用实例：细菌质粒DNA的提取 取在LB培养基中培养15hr的黄杆菌P3菌液（OD600=1.8）2ml，置于离心管离心； 倒去上清，加入0.1ml 25mM Tris-HCl缓冲液（pH8.0，内含50mM EDTA-Na2、2mg/ml溶菌酶），28度作用30min。 加入0.2ml裂解液（0.2M NaOH，2%SDS）摇动5min，即呈清亮粘稠状态。 加等体积的苯酚:氯仿抽提，析出的白色物质即为蛋白； 离心，上层水相即为含有质粒DNA的粗制品。 * 本章结束 * * * 盐析：刘叶青69 这过滤是少量的，工业上大量怎么办。对于菌体细小、杂蛋白含量高、难过滤的发酵液，常采用“絮凝技术”使细小的悬浮粒子聚集成粗大的絮团，以便加快过滤速度。 碱式氯化铝通过水解过程形成氢氧化铝凝胶，对水中的悬浮物及可溶解的杂质，通过吸附桥架作用形成大的不溶物集团，从而达到沉降的目的。 絮凝剂 刘叶青67 有机溶剂也可以进行萃取：刘叶青74 * 盐析：刘叶青69 这过滤是少量的，工业上大量怎么办。对于菌体细小、杂蛋白含量高、难过滤的发酵液，常采用“絮凝技术”使细小的悬浮粒子聚集成粗大的絮团，以便加快过滤速度。 碱式氯化铝通过水解过程形成氢氧化铝凝胶，对水中的悬浮物及可溶解的杂质，通过吸附桥架作用形成大的不溶物集团，从而达到沉降的目的。 絮凝剂 刘叶青67 有机溶剂也可以进行萃取：刘叶青74 * * 第二章 生物大分子的制备 生物材料的选择 细胞的破碎 生物分子的抽提 生物分子的浓缩 有效成分纯度和性质分析 * * 与一般化学分离法相比： 1、生物材料组成非常复杂，并且在分离过程中仍在进行代谢变化，如蛋白质和核酸的水解。 2、有些化合物的含量极微，如激素等。 3、许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。 4、生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素很多，实验方法经验性较强。 * 理化性质 分离及纯化方法 分子大小和形态 差速离心、超滤、分子筛、透析 溶解度 盐析、萃取、分配层析、结晶 电荷差异 电泳、等电聚焦电泳、离子交换层析 生物功能专一性 亲和层析 生物大分子的理化性质 与分离纯化方法的选择 制备方法的选择 以生物大分子的理化性质为依据 理化性质不同，所选用的分离提纯方法也不相同 有效成分含量较高的 提取较容易的 利于保存的 、材料的选择 第一节 材料的选择与处理 * （1）冰冻：新鲜的脏器要清洗，去血、脂肪、筋。分 割，包保鲜膜-50～-70℃存放。 （2）干燥：脏器放入丙酮中脱水，干燥后磨粉存放。 （3）