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CB实验四 小鼠肾细胞的原代培养 赵 刚 医学生物学教研室 2010秋季版 一. 目的要求 1、掌握细胞培养技术的原理 2、熟悉细胞原代培养的基本方法 3、了解细胞培养技术的应用 网上有哪些信誉好的足球投注网站：细胞培养、cell culture的结果（网页总数） 2010-10-27 百度结果： 细胞培养--5800000 cell culture--4070000 Google结果： 细胞培养--1540000 Cell culture-医学研究中的细胞培养 肿瘤细胞培养 淋巴细胞培养 心肌细胞培养 平滑肌细胞培养 神经细胞培养 细胞培养技术与中药研究 抗癌中药的筛选. 中药抗肿瘤作用与机理研究. 中药的细胞药理学的研究. 名贵中草药的培育. 药用植物细胞的培养 二、细胞培养的原理与背景 细胞培养的类型 原代培养（primary culture） 从体内取出细胞或组织所进行的首次的培养。 传代培养（subculture） 将细胞从一个培养瓶转移到另一培养瓶即为传代，也称再培养。 培养中的人胎儿成纤维细胞 培养中的HeLa细胞 培养中的HeLa细胞 肺腺癌 A549 细胞 细胞培养技术方面的文献 细胞培养技术方面的文献 细胞培养技术方面的文献 细胞培养技术方面的文献 国际上著名的细胞库——ATCCAmerican Type Culture Collection美国标准细胞库。网址：www. atcc .org ATCC是世界最大细胞库。下属一组协作实验室和一个由众多专家组成的咨询委员会。ATCC也是美国国立癌症研究所（NCI）和NIH的资源库。 ATCC也是WHO的国际培养细胞文献中心。ATCC现液氮冻存5000种已经鉴定的细胞系，包括正常人和各种病患者皮肤成纤维细胞系. ATCC接纳来自各国已鉴定的细胞予以贮存，同时也向各国研究者or实验室免费提供研究用细胞（做盈利性研究时收费）. 我国主要细胞库： 武汉细胞库（CCTCC）、上海细胞库 中国典型培养物保藏中心（CCTCC）： ——China Center for Type Culture Collection 1985国家知识产权局指定、教育部批准建立的专利培养物保藏机构，受理国内外用于专利程序的培养物保藏。包括细菌、真菌、人与动物细胞系、转基因细胞等。1987年CCTCC加入世界培养物保藏联盟（WFCC）， 1995年起成为布达佩斯条约国际确认的培养物保藏单位（IDA）。　　 CCTCC已保藏有来自21个国家的各类专利培养物1600多株，与科研、教学和生产相关的非专利培养物5000多株，现有培养物资源总数近8000株。目前CCTCC的保藏种类在国际上名列第二，仅次于美国的ATCC 。 三、细胞培养所需的条件 无菌条件：净化工作室、超净工作台、电热烤箱、高压灭菌器、 滤器、紫外灯、抗生素。 细胞生长条件：纯水发生器、培养箱、培养板、培养瓶、培养液、血清。 细胞检测条件：倒置显微镜、酶标仪 、 震荡器、离心机、移液器 。 细胞保存条件：液氮罐、低温冰箱、 细胞培养所需设备 细胞培养所需设备：超净工作台 细胞培养所需设备：灭菌器 细胞培养所需设备：培养箱 细胞培养所需设备：倒置显微镜 培养细胞的观察与照相记录——显微摄影 细胞培养所需设备： 搅拌器与酸度计  细胞培养所需小型器材 培养液过滤除菌器（正压式） 细胞培养所需小型器材： 针头式滤器 培养用器皿：培养瓶、培养板 细胞培养所需小型器材 移液器（枪） 培养基: 细胞的粮食 维持体外细胞生存和生长的溶液。 天然培养基、合成培养基。 天然培养基： 血清、血浆、组织提取液（eg：鸡胚浸液） 优点：营养成分丰富，培养效果好。 缺点：来源受限、 成分复杂。 合成培养基 是根据细胞生存所需物质的种类和数量， 用人工方法模拟合成的。常用商品培养基： RPMI-1640 、TC199、MEM、 DMEM… 主成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐 … 优点：标准化生产，组分相对固定、成本低 。 缺点：缺少某些成分，不能完全满足细胞需要。 1640培养基成分表 四、细胞培养的一般操作 玻璃器皿的清洗与灭菌 细胞培养液的配制 细胞的原代培养操作 细胞的传代培养操作 压力蒸汽灭菌 原理：通过高温高压和蒸汽良好的穿透力，使细菌蛋白凝固变性而