草莓、大花蕙兰脱毒培养.pptVIP

* * 三、草莓的脱毒与快繁 （一）分类学地位 草莓在植物学分类上属蔷薇科，草莓属，在园艺学上属小浆果。 草莓是多年生宿根草本植物，易栽培，结果早。果实鲜艳美丽，浓郁芳香，柔软多汁，且富含糖、蛋白质、磷、钙、铁及大量维生素和有机酸。除鲜食外还可加工成果酱、果汁、果酒、糖水罐头及各种冷饮和速冻食品。在世界各国的小酱果生产中草莓的产量及栽培面积一直居于首位。由于它是成熟最早的鲜果，所以市场价格也比较高，成为一种稳定而收入高的栽培水果，近几年来草莓栽培的技术革新取得了显著效果，为了解决快速繁殖优质脱毒种苗，越来越多的国家采取茎尖分生组织培养法，即可快速育苗，还可以克服草莓长期营养繁殖致使病毒累积而产生的退化现象，使草莓生产得到了恢复和发展。 （二）草莓生产上存在的问题 目前生产上存在的问题是： 1.种苗培育上多数仍沿用传统繁殖方法，病毒感染严重，产量低下。 2.栽培方式上，大多数单用大田栽培，栽培技术落后。 3.采收、贮运、加工技术不配套，方式陈旧。 （三）草莓常见病毒 我国明确鉴定的7有种，其中4种造成严重的经济危害：草莓斑驳病毒、草莓皱缩病毒、草莓镶嵌病毒、草莓轻型黄边病毒，这些病毒主要由蚜虫传播引起。 （四）草莓的脱毒与快繁技术 1.脱毒 主要有四种：小茎尖分生组织培养脱毒、花药和叶片培养脱毒、热处理加小茎尖脱毒。 （1）小茎尖分生组织培养脱毒 ①培养程序 于每年6月～8月，选取生长充实的匍匐茎(温室的材料一年四季都可取材)或新长成的小秧苗。材料取回后，用手剥去外层大叶，在自来水下冲洗2h～8h，然后，将材料进行表面消毒。消毒的药品及其使用浓度有多种。常用有两种：a.用70％酒精漂洗一下，再用0.1％～0.2％升汞或6％～8％次氯酸钠浸泡，浸泡时间依材料老嫩而异，一般为2min～10min，然后把材料移到超净工作台上操作。b.先用70％酒精漂洗一下，0.1％新洁尔灭浸泡15min～20min，再用1％过氧乙酸浸泡2min～5min，移到超净工作台上操作。 ②接种 表面消毒后，在超净工作台上用无菌水冲洗3次，然后置于双筒解剖镜下，像剥大白菜一样，一层层地剥去幼叶和鳞片，露出生长点，可带有1个～2个叶原基，未经热处理的植株，应取生长点或只带1个叶原基的生长点大小约0.1mm～O.2mm。如经热处理后的植株生长点可大一些，一般0.4mm～0.5mm，带有2个～4个叶原基。将这个生长点用细长的解剖针挑出，放入事先准备好的盛有培养基(草莓分化培养基及繁殖培养基为MS+BA0.5～1.0mg/L、pH值5.8)的培养瓶中，置于培养室中培养成小植株，待长满瓶后进行继代繁殖，诱导发根等一系列操作。 （2）花药培养 花药培养的最初目的，是培育起源于花药内部花粉粒的单倍体植株，并使单倍体加倍，作为育种材料的来源。 （3）叶片和叶柄的培养 在超净工作台上，从茎尖培养已得到的无毒试管苗中剪取叶片和叶柄，先诱导出愈伤组织然后再分化出苗，这也是一种快速育苗的方法。 （4）热处理加小茎尖培养脱毒 将盆栽草莓苗置于高温热处理箱内，逐渐升温至38℃，夜间温度降至25℃左右，箱内湿度为60％～80％，保持17d，将新长的匍匐蔓取下进行茎尖组织培养。热处理加茎尖培养可达到较高的脱毒率。因草莓不耐高温，处理过程中试材死亡率高，故大面积生产时采用小茎尖分生组织培养进行脱毒。 2、病毒鉴定 (1)生物学鉴定 从被检验的草莓植株采集幼嫩的成叶，除去左右两片小叶，把中间小叶前端剪去1／3，以减少蒸发，并将其削成带有lcm～1.5cm叶柄的接穗，叶柄切面成契形。同时，在指示植物上除去中间的小叶，在叶柄的中央部分切一个1cm～1.5cm的契形口，在此插入接穗，用细棉线包扎接合部，涂上少量凡士林以防止干燥(如图)。接种后，为了促进成活，罩上聚乙烯塑料袋或放在喷雾室内保湿，这样可维持2周时间。若接穗染有病毒，则在接种后1个月～2个月，在新展开的叶片、匍匐茎或老叶上出现病症。每一指示植物可嫁接2片～3片待测叶片，叶片要选取幼龄叶。此法可全年进行。 图为野生草莓小叶嫁接法示意图 (2)指示植物鉴定 常用草莓病毒指示植物是EMC系、VC系、维吉尼亚草莓(Ｆ.viginana)中的King和Ruden。 (3)电子显微镜鉴定 利用电子显微镜鉴定，比生物学鉴定直观，而且速度快。 (4)血清酶联免疫测定法 这是近年来发展应用于植物病毒的新方法，它有极高的灵敏度，方法简便，工作效率高。但由于草莓的病毒分离提纯还存在一定困难，目前尚处于研究阶段，未能推广应用。 3.继代培养及诱导发根 无论是由茎尖、花药或叶片培养得到的再生植株都可根据需要进行数次继代培养以增加无毒苗的繁殖系数。待茎、叶分化的小