阿奇霉素分散片微生物限度检查计数方法验证.docVIP

目 录 一、概述 1 二、目的 1 三、范围 1 四、验证组组成 1 五、测试环境条件要求 1 六、验证步骤 2 （一）细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 2 （二）控制菌方法验证 4 七、再验证 6 八、评价 6 九、附表 6 阿奇霉素分散片微生物限度检查计数方法验证 一、概述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌、霉菌、酵母菌及控制菌检查。根据《中华人民共和国药典》2005年版（二部）规定，应对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。 二、目的 确认所采用的方法适合于阿奇霉素分散片的微生物限度检查，即确认阿奇霉素分散片在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 三、范围 适用于阿奇霉素分散片微生物限度检查方法的验证实施。 四、验证组组成 组长： 成员： 五、测试环境条件要求 所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的水平单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境已定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证，并符合要求。 六、验证步骤 本品为大环内酯类抗菌药，对革兰氏阳性需氧菌及革兰氏阴性需氧菌均具有抑菌性，拟采用离心集菌+薄膜过滤法进行细菌计数检查，采用常规法进行霉菌和酵母菌计数。 （一）细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 1.菌种 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63 501 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003 大肠埃希菌CMCC（F）44 102 白色念珠菌CMCC（B）98 001 黑曲霉CMCC（F）98 003 2.培养基、试剂、试液 营养肉汤培养基或营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基 pH 7.0 无菌氯化钠-蛋白胨溶液 3.仪器设备 高压蒸汽灭菌器、净化间、净化工件台、恒温水浴锅、天平、恒温培养箱 管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的10ml无菌毛细吸管 4.样品来源 为本公司一车间所生产,批号分别为: 5.菌液制备 5.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，于30~35℃培养18～2418～24～5.2取上述金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌培养物1ml加9ml的 0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释至10-5 ～10-750～100/ml，做活菌计数备用。 5.3取上述白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9 ml10递增倍稀释至10-5 ～10-50～100/ml，做活菌计数备用。 5.4取上述黑曲霉斜面培养物，加3～5ml10ml无菌毛细吸管），取1 ml 加9 ml的 0.9%无菌氯化钠溶液（10-1），逐管10倍递增稀释至10- 4～50～100/ ml，做活菌计数备用。 6.供试液制备 取供试品10g,加pH 7.0 无菌氯化钠-蛋白胨溶液至100ml, 混匀，制成浓度为1：10的供试液。 6.1上述供试液取10ml, 500r/min离心5min, 取上清液再以3000r/min离心20min, 留底部集菌液约2ml，加pH 7.0 无菌氯化钠-蛋白胨溶液补至10ml,混匀，作为细菌计数检查的供试液。 6.2霉菌、酵母菌计数检查直接取用上述1：10的供试液。 7.计数方法验证过程 7.1试验组： 7.1.1 取灭菌的直径为90mm的平皿6个，各倾注温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，备用。 分别取供试液2ml，按《中国药典》2005年版二部附录XI J中“薄膜过滤法”过滤，用600ml冲洗液冲洗，并在最后一次冲洗液中加入相应的试验菌1ml。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌分别制备2张滤膜。取下滤膜，菌面朝上贴于平皿上，倒置培养。 7.1.2取灭菌的直径为90mm的平皿4个，各倾注不超过45℃的溶化的玫瑰红钠琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，备用。 2个平皿各加1:10供试液1ml，白念菌悬液1ml。2个平皿各加1:10供试液1ml，黑曲霉菌悬液1ml。倒置培养。 7.2菌液组 每种菌悬液用两个平皿 取1ml菌悬液，加入平皿中，倾注不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基15ml-20ml，混匀，凝固，倒置培养。 7.3供试品对照组 取1:10供试品液1ml，按菌落计数方法测定7.4稀释剂对照组 用稀释剂代替供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50－100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 8.结果 进行3次独立的试验，结果记录于表