第3节紫外吸收光谱的应用幻灯片.pptVIP

一般常用的标准曲线法步骤如下： a. 先将待测样品组分的标准样配成一定浓度的溶液，做紫外可见光谱（A~λ、 lg κ ~λ或κ ~λ），找出λmax。 b. 将波长固定在λmax处。测定一系列不同浓度待测样品组分的标准样溶液的吸光度。以溶液浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，作标准工作曲线。 c. 未知样品用相同溶剂配成合适浓度的溶液，在λmax处测定其吸光值A未。 d. 在标准工作曲线上找出对应A未的浓度，再计算未知样品中待测组分的含量。 动画 示差分光光度法（示差法） 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs (cs cx)，则： Ax= κ b cx As = κ b cs ΔＡ＝Ａx －Ａs = κ b(cx - cs ）= κ bΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ， ΔＡ与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc （2）高含量组分的测定 指被测体系中有两个以上的吸光组分，进行多组分混合物定量分析，依据是吸光度的加和性。假定溶液中同时存在两种组分X和Y，吸收光谱一般有两种情况。 2.多组分的同时测定 ⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可分别在波长λ1、λ2时，测得组分a和b，而相互不产生干扰。 ⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则在波长λ1、λ2，测得吸光度A1和A2，由吸光度的加和性求解联立方程组，得出各组分的含量ca、cb。 A1= κ a1bca ＋ κ b1bcb A2= κ a2bca ＋ κ b2bcb 应用 配位显色反应 当金属离子与有机显色剂形成配合物时，通常会发生电荷转移跃迁，产生很强的紫外—可见吸收光谱。 氧化还原显色反应 某些元素的氧化态，如Mn(Ⅶ),Cr(Ⅵ)在紫外可见光区强烈吸收，可利用氧化还原反应对待测离子进行显色后测定。 例如：钢中微量锰的测定，Mn2＋不能直接进行光度测定 2 Mn2＋ ＋5 S2O82-＋8 H2O =2 MnO4＋ + 10 SO42-＋ 16H+ 将Mn2＋ 氧化成紫红色MnO4＋后，在525 nm进行测定。 反应体系的酸度 在相同实验条件下，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH范围。 动画 例1：纤维素酶降解纤维素制备葡萄糖产率计算 DNS(3,5－二硝基水杨酸) 与还原糖发生氧化还原反应，生成了3–氨基–5–硝基水杨酸，其产物在煮沸条件下显色，其颜色深浅与还原糖含量有比例关系，利用这一原理测定还原糖的含量。 用蒸馏水溶解100 mg葡萄糖定容到100 ml配制成1 mg/ml的标准葡萄糖溶液。分别取0、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml标准葡萄糖溶液于6支试管中，再补加蒸馏水至1.0 ml，分别加入0.5 ml DNS显色剂，放入沸水浴中煮5分钟急速冷却，再加4ml蒸馏水。用分光光度计在540 nm波长下测其吸光度值。以吸光度 A为纵坐标，标准葡萄糖浓度为横坐标，作标准曲线，并可得到曲线方程以及相关系数。 取样品液1.0 ml于试管中，加入0.5 ml DNS显色剂，放入沸水中煮5分钟，急速冷却后加4 ml蒸馏水，在540 nm波长下测其吸光度值，并可直接读出样品的浓度为0.216 mg/mL。 葡萄糖产率的计算 葡萄糖产率＝ ×100% DE%= c = 0.096×A– 0.007 r = 0.9993 脱色前后样品 左：脱色前 右：脱色后 例2：生物石油馏分的脱色研究 脱色率DE%= a. 深色馏分; b. 脱色后的馏分; c. 0#柴油 紫外吸收光谱图 * * * * * * * * * * * 第四章 紫外-可见分光光度法 一、定性分析 二、结构分析 三、纯度检测 四、定量分析 第三节 紫外吸收光谱的应用 一、定性分析 紫外-可见吸收光谱可用于鉴定有机化合物。在鉴定有机化合物时，通常是在相同的条件下，比较未知物与已知标准物质的紫外光谱图，若两者的谱图相同，则可认为待测样品与已知物质具有相同的生色团。