草履虫培养及富集浓缩的方法-国家斑马鱼资源中心.PDFVIP

地址：武汉市武昌区东湖南路7 号 邮编：430072 电话：027 邮箱：zebrafish@ 网址： 草履虫培养及富集浓缩的方法 草履虫是一种常见的单细胞生物，具有个体大、易培养、繁殖速度快等特征， 是理想的斑马鱼幼鱼开口饵料。国家斑马鱼资源中心（CZRC ），在斑马鱼幼鱼 期间5 ~ 15 dpf （days post fertilization ），选择草履虫作为主要饵料，幼鱼的存活 率可达90% 以上。CZRC 拥有优质的草履虫种源（中心提供种源为 500 个/mL ）， 可对外提供服务（/Products/ProductDetail.aspx?CZRCID=Pr1 ）， 下面将简单的介绍CZRC 草履虫培养及富集浓缩的方法。 1. 材料 酵母粉（片）、小麦粒、NaHCO 、葡萄糖、纯水、无菌培养瓶 （160 mL）、 3 玻璃平皿 （直径150 mm）、灭菌管（12 mL）、过滤筛（120、500 和1250 目）。 2. 操作步骤 2.1 草履虫种源的培养 2.1.1 培养液配制 1、在1 L 纯水中加入0.20 g NaHCO3 后，湿热灭菌。 2 、称取0.25 g 酵母粉放入1.5 mL 离心管中密封，干热灭菌。 3、将 10 ~ 15 枚小麦粒放入灭菌管 （见附图1）中，同时加入少量纯水浸 没麦粒，湿热灭菌。 4 、待上述灭菌结束后，静置至室温，在无菌操作台中，将灭菌酵母加入含 NaHCO3 的灭菌水中混匀。即配制成0.25 g/L 酵母培养液。 地址：武汉市武昌区东湖南路7 号 邮编：430072 电话：027 邮箱：zebrafish@ 网址： 附图 1 2.1.2 草履虫接种 1、在无菌操作台中，将酵母培养液按每瓶120 mL 分装到无菌培养瓶 （见 附图2 ）中，同时在每一个培养瓶中加入 1 ~ 2 粒灭菌过的小麦粒。 2 、将事先准备好的草履虫种源（可在CZRC 购买），接种 10 ~ 20 mL 到 培养瓶中，确保草履虫密度不低于25 个/mL （密度统计方法见2.4 ）。将接种好 的培养瓶放入恒温培养箱中，15℃长期培养（1 ~ 3 个月）。 3、需要种源时，将草履虫培养瓶从 15℃培养箱中拿出，按照 1:1 接入新 鲜灭菌培养液，并放置28 ℃恒温培养箱中培养3 ~ 7 天。 4、选择草履虫密度高 （ 1000 个/mL ）、运动快、生命力旺盛的培养瓶作 为种源。 附图 2 地址：武汉市武昌区东湖南路7 号 邮编：430072 电话：027 邮箱：zebrafish@ 网址： 2.2 草履虫高密度培养 2.2.1 培养液配制 在1 L 纯水中分别加入0.25 g 碳酸氢钠、0.2 g 葡萄糖、0.5 g 酵母粉后密封， 70℃烘箱中烘2 ~ 3 h 后放置室温待用，培养液pH 范围为7.0 ~ 7.5 。 2.2.2 草履虫接种 1、将草履虫种源，按照 1:2 的比例接种，即 100 mL 草履虫种源接种到装 有200 mL 新鲜培养液的玻璃平皿 （见附图3 ）中。 2 、将平皿放置28 ℃恒温培养箱中培养3 ~ 7 天，每日统计平皿中草履虫的 密度。最高密度可达2000 个/mL 。 3、培养过程中若培养液由浑浊变清，且密度较低时，可适量的补充新鲜酵 母浓度较高的培养液。密度达到2000 个/mL 左右时，可以按照2.3 进行富集浓 缩，或重复上述步骤1 接种。此时，草履虫属于开放培养存在污染其它单细胞生 物的可能，所以不能作为种源。 4 、将培养温度提高到3