草菇凝集素VLr2的分离纯化及其凝血活性研究-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１５年第４３卷第５期 — ２７３— 刘　主，肖仔君，何智丹，等．草菇凝集素ＶＬ－２的分离纯化及其凝血活性研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（５）：２７３－２７５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０５．０９１ 草菇凝集素ＶＬ－２的分离纯化及其凝血活性研究 １ ２ １ １ 刘　主 ，肖仔君 ，何智丹 ，黄绍明 （１．韶关学院英东生命科学学院，广东韶关５１２００５；２．韶关学院英东食品科学与工程学院，广东韶关５１２００５） 　　摘要：以草菇子实体为材料，通过ＰＢＳ浸提、硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－５２纤维素离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶 过滤层析等步骤，分离获得草菇凝集素单一成分ＶＬ－２。在此基础上，开展了ＶＬ－２对仓鼠、小白鼠、猪、狗、猫、驴、 鸭、鸽子、兔、蛙、蛇、鸡等１２种动物血红细胞的凝血活性试验，结果发现ＶＬ－２对上述前１１种动物凝血活性的效价分 别为１０２４、１０２４、５１２、４０９６、４０９６、１０２４、６４、６４、１２８、６４、２０４８Ｕ／ｍｇ，而对鸡血红细胞没有凝血活性。 　　关键词：草菇；凝集素；分离纯化；凝血活性 　　中图分类号：Ｑ９４６．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０５－０２７３－０２ 　　凝集素（ｌｅｃｔｉｎ）是一种非免疫起源、不具有酶活性、可凝 纤维素（Ｗｈａｔｍａｎ，英国），ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５（ＧＥ，美国），丙烯酰 集细胞或沉淀糖复合物的蛋白质或糖蛋白，该蛋白可专一识 胺、甲叉双丙烯酰胺、Ｔｒｉｓ均为进口分装，其他试剂均为国产 ［１－２］ 别糖并与之非共价、可逆地结合 。它对血细胞、淋巴细 分析纯。 胞、恶性细胞均有凝集作用，具有鉴定血型及微生物、抗感染、 Ｊ－ＭＣ微控高速冷冻离心机（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ，美国）， ２ 抗炎症、抗血栓，促进细胞分裂、免疫调节等功效，已成为相关 Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００分光光度计（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒａｍａｃｉａＢｉｏｉｅｃｈ，瑞 ［３－４］ 领域的特效工具 。 士），ｍｉｎｉＶＥＣｏｍｐｌｅｔｅ微型垂直电泳槽（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒａｍａ 食用菌凝集素是食用菌中重要的药理成分之一，研究显 ｃｉａＢｉｏｉｅｃｈ，瑞士），ＥＰＳ３５０１电泳仪（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒａｍａｃｉａ 示：食用菌凝集素在大多数食用菌子实体的杀虫活性方面起 Ｂｉｏｉｅｃｈ，瑞士），ＡＬＰＨＡ１－２ＬＤＰＬＵＳ冻干机（Ｃｈｒｉｓｔ，德国）。 重要作用，且不受蛋白酶及热的影响，是一种良好的杀虫剂候 １．２　试验方法 ［５］ 选材料，有可能成为一种抵抗害虫的基因源 。食用菌凝集 １．２．１　草菇凝集素的粗提　所有提取步骤均在４℃下操作， 素除了具有与植物凝集素相似的功能外，它还在促进菌丝分 取新鲜的草菇子实体１０００ｇ，在１０００ｍＬ浓度为１０ｍｍｏｌ／Ｌ ［６－７］ 化、子实体形成等方面具有活性 。近几年来，国内外对食 的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）（ｐＨ值８．０，含０．１％的２－巯基乙醇） 用菌凝集素的研究不断升温，食用菌凝集素已成为继食用菌 中匀浆，静置３ｈ。匀浆液在３５００ｒ／ｍｉｎ下离心２０ｍｉｎ。取 ［８］ 多糖之后的另一