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吉林大学药学院 第十三章 发热、疼痛及抗应激实验方法 吉林大学 药学院 [造模机制] 发热反应大多是由致热因子作用于机体，产生和释放内热原，并进一步影响体温调节中枢，使体温调定点提高，体温相应升高。此外，物理方法可直接刺激下丘脑体温调节中枢，引起体温升高。 *发热动物模型常用实验动物 实验前需挑选健康、体温合格的动物。*家兔发热反应较灵敏而稳定，故在发热研究中最为常用。也可以选大鼠。而小鼠和豚鼠的恒温功能差，对发热刺激的反应性低，不宜用于复制发热模型。 发热动物模型常用致热原(因子) 复制发热动物模型的常用致热原有：伤寒、副伤寒菌苗、大肠杆菌菌液、细菌内毒素(感染性)、干酵母、角叉菜胶、松节油、2,4-二硝基苯酚、蛋白胨及脱脂奶粉(非感染性)等。*引起动物发热所需致热原的剂量与致热原的致热效价、实验动物的耐受力等有关。故同一致热原在不同时间、条件、在不同批动物中使用时，所需剂量可能很不一致。因此，在每次实验前，应通过预试验来确定致热原的合适剂量。 常用发热动物模型 复制发热动物模型时，一般首选内毒素引起的家兔发热模型，然后为干酵母致大鼠发热模型、角叉菜胶致大鼠发热模型和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热模型。 内毒素引起家兔发热模型 [造模原理] 内毒素（endotoxin）是最重要的致热原，进入机体后可激活单核巨噬细胞产生内生性致热原，内生性致热原经血流进入大脑，于下丘脑前部引起体温调节中枢环核苷酸系统改变，前列腺素合成增加，体温调定点上移，产热增加，散热减少，引起发热。 [模型评价] * 本法为测定药物解热作用的最经典通用方法，体温曲线呈内毒素发热的典型双峰热型，结果稳定、可靠、重复性好，是研究解热药作用的有用方法。 [注意事项] 室温、剂量等。 干酵母引起大鼠发热模型 [造模原理] 用酵母（yeast）混悬液给大鼠（或家兔）皮下注射，先引起动物体温下降。一段时间后动物体温明显升高，并持续较长时间，局部有明显炎症反应，与临床伴内脏或皮肤有明显急性炎症的里热证类似，故可用此作为发热动物模型以研究药物的解热效果。 [结果] 皮下注射干酵母悬液后，大鼠体温先有一个迅速而明显的体温降低阶段，至4 h左右始恢复正常，然后迅速升高，至7~10 h达高峰，持续12 h以上。 [模型评价] 啤酒酵母、甜酒干酵母及面包酵母。啤酒酵母的来源及保存不便，且其用量不易做到各批实验保持一致。面包酵母制成悬液给大鼠皮下注射，能引起与啤酒酵母类似的体温变化，原料易得可长期保存。 [注意事项] 操作上的细节。 角叉菜胶引起大鼠发热模型 [造模原理] 较大剂量的角叉菜胶皮下注入可引起一个持续的炎症反应，并激活巨噬细胞，引起发热。 [模型评价] 角叉菜胶所致大鼠发热时，注射脚爪部位有红、热、肿、痛为特点的强烈的急性炎症，又有全身发热。发热有一个较长的潜伏期且稳定，*故本法是一个用以研究解热药作用的有用模型，尚能同时结合观察药物对角叉菜胶所致急性鼠爪肿胀的影响，则对阐明清热药作用尤为有用。 2,4-二硝基苯酚引起大鼠发热模型 [造模原理] 2,4-二硝基苯酚（2,4-dinitrophenol）是一种代谢刺激剂，注入体内后可引起产热增强，造成机体发热。 [模型评价] 本法发热迅速，稳定，消退也快，致热剂价廉易得，使用大鼠，故本法是一个较好的发热模型。但本法发热机制在于剌激产热，为全面评价药物解热作用，还须与其他方法如内毒素所致发热配合应用。 *发热实验注意事项 实验动物：发热实验模型对动物的要求较高，以家兔最为常用，发热反应典型而稳定。亦可选用大鼠。小鼠、豚鼠则因恒温机能差，对发热刺激反应性低，不宜选用。 动物体重：家兔体重2kg左右效果最好，大鼠体重以150~200g为最适宜。 注意事项 3.实验室温：实验环境低温时家兔的发热反应比在常温环境中强而持久，因此在实验时应使室温保持在偏低水平（17℃~ 25℃）。 4.剂量的选择：给动物注射菌液或内毒素时，注射量与发热反应强度并不一定成正比，注入量过大，体温有时不但不升高反而下降。剂量的选择必须恰到好处，每次实验前预实验确定致热源剂量。 注意事项 常用实验动物正常体温范围 狗：37.5~39.9℃；豚鼠：37.3~39.5℃；猫：38.0~39.0℃；大鼠：36.6~38.3℃；兔：38.0~39.2℃；小鼠：36.0~38.0℃； 人 第二节 疼痛动物模型 疼痛作为主观的感受和体验，是一种复杂的生理心理反应。动物实验只能间接借助由于伤害性刺激引起的“痛”反应作为测量指标。 二、疼痛动物模型 热刺激法 化学刺