第04章-免疫组化技术-1PPT.ppt

第四章 免疫组织化学技术;第一节 免疫组织化学理论基础;T细胞; 1．抗原的性质 （1）异物性：机体能对进入体内的异种、异体的大分子物质产生免疫应答，该物质与机体的种系关系越远，其免疫原性越强，机体的免疫反应也越强。同种异体物质也可作为抗原，如人红细胞ABO血型抗原，人类白细胞组织相容性抗原（HLA）。; 1.免疫原性 指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。 ;;; （2）大分子胶体：抗原分子量越大，其表面积越大，接触免疫细胞的机会越多，在体内停留时间长而不易排除，因而对机体的刺激作用也越强。一般具有免疫原性的物质，分子量常在10000以上。小于5000~10000的蛋白质分子，免疫原性很弱或完全没有。 （3）特异性：一种抗体只能与相应的抗原反应而不能与其他抗原反应，这种抗原称为特异性抗原（specific antigen）。不同的抗原物质常含有共同的抗原成分，即一种抗体可以与二种或二种以上不同抗原反应，这些抗原称为共同抗原（common antigen）。; 3．抗原的种类 分类方法很多。根据抗原的性质分为完全抗原和不完全抗原： （1）完全抗原：同时具有免疫原性和反应原性的物质，能在体内诱导免疫应答，产生效应物质，并可与产生的效应物质特异性结合，如细菌、蛋白质等。 （2）不完全抗原 或半抗原，指在体内单独存在时时免疫原性、但能与相应抗体特异性结合的低分子化合物或化学基团。能与半抗原结合使其具有免疫原性的蛋白质部分称为载体（carrier），载体使结合物具有免疫原性，半抗原决定结合物的特异性。 ; 3、完全抗原与半抗原 1）完全抗原（complete antigen) 具有免疫原性和反应原性的物质。 2）半抗原（hapten，又称不完全抗原incomplete antigen），无反应原性，只有抗原性的物质。 半抗原 + 蛋白质 → 完全抗原;半抗原 ;2．抗原决定簇（AD） 概念：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化 学基团，又称为表位 AD的数目、性质和空间构象决定抗原特异性 抗原以AD与相应抗原受体及抗体特异性结合 ; （二）抗体 机体的免??活性淋巴细胞在抗原的刺激下成为致敏淋巴细胞，进而分化、增殖为记忆细胞和淋巴母细胞，后者再分化为浆细胞，产生和分泌相应的抗体。根据抗体发挥功能的不同可以称为凝集素、调理素和沉淀素等。 1．抗体的性质 1972年，国际免疫学联合会正式将化学机构与抗体相同或相似的一类球蛋白分子统一命名为免疫球蛋白（Ig）。人类Ig有Ig G、IgA、 IgM、 IgD、 IgE，五种Ig都具有IgG的基本结构。IgG分子有4条对称的多肽链，两条轻链（L链）和重链（H链），以共价和非共价二硫键连接组成，通常用L2H2表示。多肽链的氨基(N) ;末端的氨基酸组成及序列随结合抗原的特异性而异，称可变区（V），是与抗原结合的部位，也称Fab段；羧基（C）末端的氨基酸组成及序列比较稳定，称为稳定区（C），是与Fc受体结合的部位，也称Fc段。 2．抗体的产生 抗原初次进入机体后，首先被抗原呈递细胞（APC）如巨噬细胞吞噬，经消化降解保留其有效的抗原决定簇（特异性抗原成分），并呈递给T淋巴细胞。 T淋巴细胞受到抗原信息刺激后，活化、增殖、分化为效应T细胞，同时分泌大量细胞因子，辅助B细胞活化、增殖、分化为浆细胞，合成和分泌抗体。; 3．抗体的种类 根据获得抗体的途径或来源不同，分为免疫抗体、天然抗体和自身抗体。根据抗原与抗体在试管内是否出现肉眼可见的免疫反应，分为完全抗体和不完全抗体。 （三）抗原抗体反应 抗原与抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应，二者统称为免疫学反应，具有高度的特异性。主要有凝集反应、沉淀反应和补体参加的各种血清学反应。抗原与抗体所形成的抗原抗体复合物不是靠化学共价键结合，而是抗原决定簇与抗体分子的抗原结合位点的相互吸引，同时还有静电引力、范德华力、氢键、疏水键等参与。;所以，抗原抗体复合物的结合不仅具有特异性，而且结合得十分稳定，二者在复合物中仍可保留各自原有的结构和化学特性，只有在特殊条件下才能解离，如低pH高浓度盐（3mol/L硫氢化钾，7mol/L尿素）。在免疫组化操作过程中，已形成复合物的抗体不可能被缓冲液从组织中洗脱，所洗去的只是未结合的