呋喃妥因代谢物快速检测试剂盒说明书.docVIP

***********生物技术有限公司 呋喃妥因（AHD）快速检测试剂盒说明书一、概要 硝基呋喃类药物因有非常好的抗菌作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。呋喃妥因在1995年被禁用。 由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃妥因代谢产物AHD；呋喃它酮代谢产物AMOZ；呋喃唑酮代谢产物AOZ；硝基糠腙（）代谢产物SEM。 用来检测呋喃妥因代谢物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术采用AHD衍生物的特异性抗体，具有很高的精确度更灵敏的反应技术要求和的检测时间。试剂盒可以测定肉类（鸡、猪、牛、鱼、虾）牛奶和蜂蜜中呋喃妥因。 二、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃妥因抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出呋喃妥因量。 试剂盒特性 试剂盒灵敏度：0.1ppb 检测下限 组织检测下限：0.2ppb 虾\鱼等水产组织因存在一定的干扰，检测下限在0.3ppb 样本回收率 水产、鸡肉、肝脏组织 …………………………… 75±15%90±15% 交叉反应率 呋喃妥因…………………………………… 100% 呋喃唑酮……………………………………… 0.01% 呋喃它酮……………………………………… 0.01% 硝基糠腙）………………………… 0.01% 三、试剂盒组成 96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原） 2、标准液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb 3、酶标二抗 12ml …………………… 红色帽 4、抗体工作液 7ml ……………………… 绿色帽 5、底物液 A 液 7ml ……………………… 白色帽 6、底物液 B 液 7ml ……………………… 红色帽 7、终 止 液 7ml ……………………… 黄色帽 8、20×浓缩洗涤液 40ml …………………… 透明帽 9、2×浓缩复溶液 50ml …………………… 透明帽 四、所用仪器、试剂 仪器： 微孔板酶标仪450nm/630nm 匀质器 振荡器 离心机 微量移液器：20(l～200(l、200(l～1000(l 多道 250(l 试剂： ┅┅乙酸乙酯 ┅┅正己烷┅┅K2HPO4·3H2O ┅┅2-硝基苯甲醛┅┅甲醇 ┅┅亚硝基铁氰化钾（K2Fe(CN)5·NO·3H2O）┅┅ZnSO4·7 H2O（供奶样用） ┅┅浓HCl ┅┅NaOH 五、样本前处理步骤样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意： （a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理需配制： 1：衍生化试剂 15.1mg 2-硝基苯甲醛 加甲醇10ml溶解（浓度为10mM） 配液2：用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1稀释（1份浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本复溶。3：C液：12.5g亚硝基铁氰化钾用去离子水定容至100ml D液29.8g 硫酸锌用去离子水定容至100ml。 4：0.1M K2HPO4 22.8g K2HPO4·3H2O 加去离子水1L。 5：1M HCl 8.3ml 浓HCl用去离子水定容至100ml。 6：1M NaOH 4g NaOH 用去离子水定容至100ml。（a）鱼虾和肉样 ┅┅用均质器均质样本┅┅接的描述方法注：样本应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存（b）奶样 ┅┅取出5ml的样本到玻璃离心管中┅┅分别加入C和D各250(l┅┅用振荡器充分混合样本后，用恒温离心机3000g以上离心10min,4-12 oC（39-54℉）。如果没有恒温离心机，则先将样本降温至大约8 oC（46℉），然后离心┅┅接的描述方法 （c）┅┅取样本到离心管中┅┅加入4ml的蒸馏水0.5ml 1M HCL和100(l ，充分振荡；┅┅接描述方法（）接上面的方法┅┅取1±0.05g的均质物（鱼虾/肉样）牛奶的离心上清液1