第7章 发酵染菌及其防治.pptVIP

第七章 发酵染菌及其防治 第七章 发酵染菌及其防治 张 杰 山西师范大学生科院微生物课程组 应用与环境微生物专业 内容提要 染菌对发酵生产的影响 发酵染菌的途径分析 发酵染菌原因及防治对策 7.1 染菌对发酵生产的影响 7.1.1 染菌对不同产品发酵过程的影响 谷氨酸发酵周期短，生产菌繁殖快，培养基不太丰富，一般较少污染杂菌，但噬菌体污染对谷氨酸发酵的威胁非常大； 乳酸的发酵过程中，由于乳酸菌发酵乳酸是一个厌氧过程，有些乳酸菌的发酵温度可以控制在50℃左右，远高于一般微生物的生长发育温度，一般情况下不会发生染菌； 柠檬酸发酵进入发酵后期时，由于发酵液pH已降到3.0以下，一般的杂菌都不会生长，发生杂菌污染的可能性比较小，而当发酵尚处于生长期时，发酵液的pH7.0左右，再加上营养成分丰富，就比较容易污染杂菌。 7.1 染菌对发酵生产的影响 7.1.2 不同时间发生染菌对发酵的影响 （1）种子培养期染菌：发现种子染菌应灭菌后弃去，并对种子罐、管道进行检查和彻底灭菌。 （2）发酵前期染菌：易染菌、应特别防止，可重新灭菌，补充营养，重新接种发酵。 （3）发酵中期染菌：发酵中期染菌，挽救处理困难，危害性大； 7.1.2 不同时间发生染菌对发酵的影响 抗生素发酵： 将另一罐发酵正常、单位高的发酵液的一部分输入染菌罐中，以抑制杂菌繁殖，同时采取低通风，低流加糖量等措施。 柠檬酸发酵： 污染细菌：加大通风量，加速产酸，降低pH，抑制细菌生长； 污染酵母 ：加0.025-0.035g/L硫酸铜； 污染黄曲霉：加入另一罐将近成熟的醪液，使pH下降，该菌自溶 污染青霉：青霉能在低pH环境下生长，可考虑提前放罐。 7.1.2 不同时间发生染菌对发酵的影响 （4）发酵后期染菌 产物积累较多，营养物即将耗尽。如染菌量不大，可继续发酵；如污染严重可考虑提前放罐。 7.2 发酵染菌的途径分析 7.2.2 染菌的检查判断 在发酵过程中，需要严格按照工艺的要求对生产的全过程进行无菌监控，如菌种制备环节、种子罐和发酵罐的接种前后及培养过程等环节，进行无菌检验。 目前，发酵企业一般采用无菌试验（无试）、样品的检查及对发酵罐内样品的直接涂片镜检等手段判断是否发生染菌。 7.2.2 染菌的检查判断 1. 无菌检查方法 无菌检查方法有显微镜观察法、肉汤培养法、斜面培养法、双碟培养法等。其中主要以显微镜观察法、肉汤培养法、斜面培养法为主。 7.2.2 染菌的检查判断 1. 无菌检查方法 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常）：观察微生物的形态特征，检查是否有与菌种形态特征不一样的其它微生物存在。 必须在实际生产中不断积累经验，提高判断的准确性。另外，为了提高染菌判断的准确性，镜检法必须结合其它无菌检查方法来进行染菌判断。 7.2.2 染菌的检查判断 1. 无菌检查方法 （2）肉汤培养基检查法（酚红变色pH 6.8-8.4） 样品直接接入灭菌的肉汤培养基中，分别于37℃、27 ℃培养，随时观察，并取样镜检。 7.2.2 染菌的检查判断 1. 无菌检查方法 （3）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先37℃保温24小时，确定无菌； 划线后分别于37℃、27 ℃培养，一般24h后镜检是否有杂菌。 7.2.2 染菌的检查判断 1. 无菌检查方法 （4）双层平板培养法 7.2.2 染菌的检查判断 2. 无菌检查的样品 对发酵生产中的各个环节进行监控，需对下列岗位的样品进行留样或无菌取样，进行无菌检查。 （1）菌种岗位的样品 一般将每批次接入种子罐后剩余的菌丝悬液或孢子悬液在无菌操作条件下接入无菌检查试验用的肉汤及斜面试管中，编号后，置37℃恒温室内培养，样品保留至该罐批发酵结束。 7.2.2 染菌的检查判断 2. 无菌检查的样品 （2）种子岗位的样品 种子罐灭菌后的样品、接种后样品、培养期间每间隔2~4h取的样品、移种样品、无试样品编号后，置37℃恒温室内培养，样品保留至该罐批发酵结束。 7.2.2 染菌的检查判断 2. 无菌检查的样品 （3）发酵岗位的样品 发酵罐灭菌后的样品、接种后样品、培养期间每间隔6h取的样品；一般培养60h后，每间隔12h取样，直至放罐。无试样品编号后，置37℃恒温室内培养，样品保留至该罐批发酵结束后12h，确认为无杂菌污染后方可弃去。 7.2.2 染菌的检查判断 2. 无菌检查的样品 （4）空气系统的样品 包括总空气过滤器、分过滤器。定期取无试样（常用肉汤培养基法），如1月1次。 7.2.2 染菌的检查判断 3. 染菌的判断 （1）染菌罐的判断 以酚红肉汤培养和斜面培养的反应为主，以镜检为辅。每个无菌样品的无菌试验，至少用2只酚红肉汤试管和2只斜面试管同时取样培养。 菌种岗位的无试样可以在无菌室内进行； 罐上