采用ＨＰＬＣ法测定乙酰半胱氨酸口服溶液有关物质.docVIP

精品论文 参考文献 采用ＨＰＬＣ法测定乙酰半胱氨酸口服溶液有关物质 张建业　温天文（通讯作者）　贾元超　陈庆峰（南京为绿生物科技有限公司　江苏　南京　２１００３２） 　　【中图分类号】Ｒ９６９．４ 　【文献标识码】Ａ 　【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０３９９－０１【摘要】目的建立乙酰半胱氨酸口服溶液有关物质控制方法。方法运用ＨＰＬＣ法测定乙酰半胱氨酸口服溶液中有关物质，色谱柱：Ｃ１８（４．６ｍｍtimes;１５０ｍｍ，５mu;ｍ）柱［流动相：甲醇：硫酸铵缓冲溶液（０．２５％硫酸铵＋０．２６％辛烷磺酸钠＋０．３４％磷酸二氢钾。ｐＨ＝１．８）为９：１。检测波长：２０５ｎｍ。结果建立的有关物质测定方法，其浓度０．１～２ｍｇ／ｍｌ内，浓度与峰面积呈良好线性关系，各条件下降解产物峰与主成分峰及辅料峰分离良好。结论本法科学、合理，适用于本品有关物质质量控制。 　　【关键词】乙酰半胱氨酸；口服溶液；有关物质；ＨＰＬＣ法　　乙酰半胱氨酸，英文名为ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＮＡＣ），是一种疗效好、安全性高的治疗呼吸道感染的祛痰药。由于乙酰半胱氨酸易氧化，尤其在水溶液中不稳定，易产生Ｌ．胱氨酸、Ｌ．半胱氨酸、Ｎ．乙酰半胱氨酸、Ｎ，Ｎ．二乙酰胱氨酸等有关物质。因此，本文建立了ＮＡＣ口服溶液有关物质的质量控制方法，并对该方法进行了验证。１仪器与材料１．１仪器ＬＣ．１０ＡＴｖｐ（ＶＰ）液相色谱仪（ＳＨＩＭＡＤＺＵ）、ｐＨＳ．３ＣＷｐＨ计（上海理达仪器厂）、电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。１．２试药ＮＡＣ对照品（中国药检所）、ＮＡＣ原料药（武汉远大弘元药业有限公司）、辛烷磺酸钠（天津市化学试剂研究所）、ＮＡＣ口服溶液（自制）等。２方法与结果２．１有关物质方法学建立２．１．１色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Ｃ１８（４．６ｍｍtimes;１５０ｍｍ，５mu;ｍ）柱；流动相：甲醇：硫酸铵缓冲溶液（０．２５％硫酸铵＋０．２６％辛烷磺酸钠＋０．３４％磷酸二氢钾；ｐＨ＝１．８）为９：１；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；检测波长：２０５ｎｍ；进样量：２０mu;ｌ。精密稳定ＮＡＣ对照品适量，配制成约５００mu;ｇ／ｍｌ溶液，ＮＡＣ主峰相对保留时间约５．５ｍｉｎ，见图１；取Ｎ，Ｎ．．二乙酰胱氨酸、半胱氨酸、Ｎ，Ｓ．二乙酰半胱氨酸、Ｎ．乙酰胱氨酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成５００mu;ｇ／ｍｌ溶液，主峰与已知各杂质峰达到有效分离，结果见图２。 　　图１ＮＡＣ对照品ＨＰＬＣ图 　图２各杂质ＨＰＬＣ图（１．Ｌ．胱氨酸，２．Ｌ．半胱氨酸，３．Ｎ．乙酰半胱氨酸，４．Ｎ，Ｎ．二乙酰胱氨酸） ２．１．２检测波长选择取ＮＡＣ对照品适量，精密称定，加流动相溶解制成１０ｍｇ／ｍｌ的溶液，照分光光度法，在４００～ ２００ｎｍ波长内扫描，结果本品在２０５ｎｍ波长处仅有末端吸收。２．１．３标准曲线的建立　精密称取ＮＡＣ对照品０．０５ｇ于２５ｍｌ容量瓶中，用去离子水溶解定容，配制成浓度２ｍｇ／ｍｌＮＡＣ对照品溶液为母液。依次取０．５ｍｌ、１ｍｌ、２．５ｍｌ、５ｍｌ、１０ｍｌ母液于５个１０ｍｌ容量瓶，去离子水定容，分别制成０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ对照品溶液，备用。 　　在上述色谱条件下，进样２０mu;ｌ，记录色谱图。以ＮＡＣ的浓度为横坐标（Ｃ），峰面积为纵坐标（Ａ）求得线性回归方程为：Ａ＝．５０７１４．３３＋７．２１times;１０６times;Ｃ，ｒ＝０．９９９５。由结果可见， ＮＡＣ浓度在０．１～２ｍｇ／ｍｌ范围内，两者浓度与峰面积呈良好线性关系。２．１．４精密度试验　精密称取ＮＡＣ对照品０．０２５ｇ于２５ｍｌ容量瓶中，用去离子水溶解定容，配制成浓度１ｍｇ／ｍｌＮＡＣ对照品溶液为母液。依次移取２．５ｍｌ、５ｍｌ、１０ｍｌ母液于３个１０ｍｌ容量瓶中，去离子水定容，分别配制成０．２５ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ的对照品溶液，进样记录色谱图，结果含量ＲＳＤ为０．９２２％，精密度良好。２．１．５回收率试验　分别精密称取三份ＮＡＣ原料药，依次为０．０１５８ｇ、０．０２０１ｇ、０．０２４４ｇ，置于１０ｍｌ容量瓶，然后按处方量加入其他辅料，用去离子水溶解定容，进样２０mu;ｌ，结果平均回收率为９９．４３％，ＲＳＤ＝０．８１１％。２．１．６检测限　取ＮＡＣ对照品约２５ｍｇ，加流动相稀释逐级稀释对照品溶液，调节仪器灵敏度至信噪比为１０：１时，计算结果最小检出量为０．２２ｎｇ。２．２专属性试验２．２．１干扰试验　分别取流动相为空白溶剂、混合后的辅料适量，加流动相制成一定浓度的溶液（按处方比例配制），按上述同一色谱条件下分别进样，记录色谱图，结果空白溶剂、各辅料峰与对照品主峰分离良好，不干扰主峰