紫外分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量.docVIP

精品论文 参考文献 紫外分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量 许熙 马召 　　(汤臣倍健股份有限公司 广东珠海 519040) 　　【摘要】探讨灵芝孢子粉中紫外分光光度法检测总三萜的优化条件。采用紫外分光光度法，以熊果酸作为标准品，用无水乙醇超声提取总三萜，吸取提取液进行减压蒸干后，加入显色剂，水浴，测定。实验表明，在548nm波长下，标准品在10～100ug范围内，吸光度与含量呈良好的线性关系，回收率在97.64%～102.31%之间，说明该方法操作简便，准确性高，能对破壁灵芝孢子粉的质量起到控制作用。 　　【关键词】灵芝孢子粉 总三萜 提取溶剂 超声提取 　　【中图分类号】R932 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）15-0030-02 　　灵芝孢子为灵芝的生殖细胞，在抑制肿瘤、增强免疫力方面作用强于灵芝子实体，破壁后的灵芝孢子粉中的有效成分三萜类化合物如灵芝多糖，核苷腺吟，蛋白质，氨基酸，维生素等更容易被人体吸收。总三萜物质含量高低已成为破壁灵芝孢子粉质量控制的重要指标。总三萜物质的检测多以熊果酸或齐墩果酸为对照品，采用分光光度法[1-4]，应用香草醛-高氯酸显色法，测定其含量。本实验以破壁灵芝孢子粉为样品，从提取溶剂，提取方式和提取条件三方面着手；进一步确定[1]试验中主要检测因素：香草醛-冰醋酸用量，高氯酸用量，水浴温度，水浴加热时间进行单因素考察后进行正交试验，选出最佳的试验条件，最后进行线性关系，稳定性，回收率的验证。确定一种应用于灵芝孢子粉三萜类含量的高效，快速，科学，安全的检测方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 样品与试剂 破壁灵芝孢子粉(福建仙芝楼生物科技有限公司)；熊果酸标准品(中国药品生物制品检定所，含量为100%)；高氯酸、冰醋酸、香草醛、无水无水乙醇、无水甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷均为分析纯。 　　1.1.2 主要仪器与设备 UV-2450紫外分光光度计(日本岛津)；MS 304/S 电子天平(梅特勒-托利多)；恒温水浴锅(苏州金坛市中大仪器厂)；旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)；KQ-500E 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标准品溶液的制备 精密称取熊果酸标准品[1-3]10.0mg,定容至100ml容量瓶中，即得0.100mg/ml熊果酸标准品溶液。 　　1.2.2 样品溶液制备 准确称取破壁灵芝孢子粉0.5g,加溶剂80ml,进行提取,冷却后过滤，提取液定容至100ml，即得样品溶液。 　　1.2.3 分析方法 取标准溶液0.0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml；样品液0.3ml蒸干溶剂后，加入一定量的5%香草醛-冰乙酸溶液和高氯酸，在一定温度下水浴加热一定时间后，移入冰水浴中，放置室温后加入5.00ml冰乙酸，摇匀后在548nm处测定溶液吸光度[2]。 　　2 结果与分析 　　2.1 提取溶剂和提取条件的选择 　　2.1.1 提取溶剂的选择 　　以无水乙醇，甲醇，乙酸乙酯，三氯甲烷[1-2]分别为溶剂，超声提取1h，制备样品溶液。水浴蒸干后，以0.4ml香草醛-冰醋酸，1.00ml高氯酸，水浴温度60℃，加热时间15min检测条件进行实验，测定吸光度，结果见图1，选定无水无水乙醇作为提取溶剂。 　　2.1.2 提取条件与提取时间的选择 　　以无水乙醇为溶剂，分别通过索氏提取和超声提取两种不同的提取方式，对其时间进行梯度试验，以2.1.1中的检测条件，进行试验，测定其吸光度，结果见图2，在一定时间内，超声提取效果优于索氏提取，在1h达到最佳。 　　图1不同提取溶剂的吸光度比较 图2不同超声提取时间吸光度比较 　　图3不同索氏提取时间吸光度比较 　　2.2 蒸干方式的选择 　　以无水乙醇为溶剂，超声提取1h，分别进行沸水浴蒸干，60℃减压旋转蒸干，75℃热风干燥蒸干，以2.1.1检测条件进行实验，比较其吸光度。结果如表1所示，不同的蒸干方式对其吸光度变化较小，选定耗时短的减压旋转蒸干方式。 　　表1 不同蒸干方式吸光度比较 　　2.3 显色剂使用的选择 　　2.3.1 5%香草醛-冰乙酸用量考察 　　按照2.2实验方法进行样品处理，改变5%香草醛-冰乙酸的用量，测定其吸光度，结果见图4。吸光度变化较大，选择0.2ml～0.4ml范围进行进一步分析。 　　2.3.2 高氯酸用量考察 　　按照2.2实验方法进行样品处理，改变高氯酸的用量，测定其吸光度，结果见图5。选定0.75～1.25ml用量进行正交分析。 　　图4 不同香草醛-冰乙酸用量的吸