蟾蜍肾上腺髓质嗜铬细胞在电镜观察研究.pdfVIP

蟾蛛肾上腺髓质嗜铬细胞的电镜观察 戴丽军 张昌杰 (广州医学院实验动物研究中心，广州 510182) (华中师范大学生物系。武汉 430070) 摘 要 本实验用透射电子显微镜观察在体和离体的蟾蛛肾上腺盆质嗜铬细胞切片.在体情况下 可见蟾蛛肾上腺份质嗜铬细胞较大，呈岛状分布于肾上腺中。离体情况下的箱蛤肾上腺砚质嗜铭 细胞具结构和功能的完整性，还可观察到在离体的嗜铬细胞中有胞吐现象，即囊泡膜向质膜靠近， 逐渐与之融合，释放出囊泡内容物. 关傲词 蟾蛛 肾上腺翻质 嗜格细胞 透射申子9VI锗 目前，在生物学、生物物理学、分子生物学、电生理学等诸多领域中，大量激动人心的 新进展快速地补充着我们有关离子通道膜生理、胞内信使、钙在时间和空间上的作用、胞质 蛋白在刺激一分泌辆联中的作用等等的基础知识。而以动物肾上腺姗质嗜铬细胞为模型进行的 有关刺激一分泌辆联机制的研究工作也正方兴未艾，这一工作最早是在60年代初由W.W. Douglas和他的同事们 (1961;1967)开创的，随后有许多科学家参与了这一实践，分别用牛 (Sewardetal.1996;Engischetal.1997),鼠(Douglasetal.1967;Pesceetal.1990),猫 (杨光、李肇特，1986)、豚鼠 (VonEuleretal.1961),蟾蛛 (Nassor-Gentinaetal.1991， 1992)、人胎 (何旦莎等，1992)等进行了实验，使这项研究由腺体水平进入细胞水平，又发 展到亚细胞水平和分子水平。Nassar-GentinaV.MarioLuxoro等人利用智利蟾蛛Caudiver- beracaudiverbera的肾上腺嗜铬细胞就有关胆碱能药物对嗜铬细胞CA分泌的影响，受体导致 的蟾赊CA分泌的可能机制.ACh或高K+引起的CA分泌，Ca+对嗜铬细胞CA分泌的影响 以及Na十在分泌过程中的作用等问题进行了研究，取得了初步进展 (Nassor-Gentinaet al.1991,1992)，但国内在这一方面的研究较少，尤其是对蟾蛛尚未见有关的报道。 本工作试图在细胞水平探讨以离体蟾蛛肾上腺髓质嗜铬细胞作为刺激一分泌藕连模型的 可行性，并利用电子显微镜研究嗜铬细胞的内部结构及胞吐过程，为胞吐分泌提供直接证据。 1 材料和方法 本工作所用的动物肾上腺为本地所产成年中华大蟾蛛之肾上腺，雌雄不限。 1.1制备分离的婚蛛肾上腺知质嗜铬细胞 取蛤蛛15只，雌雄不限，双毁髓后迅速打开腹腔，取出两侧肾脏，剪下其上淡黄色的条 状肾上腺，置于装有5m1,。℃缺Ca-任氏液的培养皿中，进人无菌操作室操作，时间不得超 过60分钟，在无菌室内用已灭菌的。’C缺Ca任氏液将肾上腺漂洗3次，洗去其上血污及其 他污染物，然后切成0.5mm,左右的小块，用滴管将肾上腺碎块转人小锥形瓶中，用移液管加 入5ml含胶原酶 (0.5^-lmg/ml)的缺Ca十任氏液，37C培养30分钟，其间不断摇动，然后 用吸管吹打50^-6。次，弃上清液。再用移液管加入5m1胶原酶一缺Ca+任氏液于锥形瓶中，在 126 37℃培养30分钟，经振荡吹打后吸取上清液于离心管中，。℃存放。重复此操作4--5次，每 次培养30分钟。最后一管于。℃下存放15分钟终止胶原酶的消化后，将收集的悬液于。C、 200g离心7分钟，弃去上清液。各管沉淀物用5m1任氏液11重悬浮，再转入150m1锥形瓶中， 于37℃培养2小时以终止消化，其间经常振动。培养2小时后用吸管吹打培养悬液，再用滴 管吸取少许悬液滴入一支小试管中，加入一滴0.4%台盼兰，混匀，放置2^-3分钟后用吸管 吸取少量置计数板的计数室内，粗略观察分离情况及细胞状况。再用移液管将培养悬液等分 试祥入若干离心管中，200g离心?分钟，弃去上清液，沉淀用5m1,0C缺Cat任氏液悬浮， 200g离心7分钟，弃去上清液，重复上述操作一次以终止牛血清白蛋白的作用。沉淀最后用 5ml,0℃缺Ca十任氏液悬浮，此即为分离的蟾躲肾上腺髓质细胞悬液，其中多为嗜铭细胞，供 实验用。 1.2在体、离体嗜钻细胞的电镜观察 首先制作离体、在体姗质嗜铬细胞样品。 将分离的细胞悬液以1500r/min离心3分钟，得到的细胞沉淀块即为离体髓质嗜铭细胞 样品。 将蟾蛤肾上腺切成0.5mm，左右的小块，即为在体蟾蛛肾上腺做质嗜铬细胞样品。