实验诊断学-外周血细胞形态.pptVIP

外周血细胞形态学检查 实验内容 血涂片的制作 瑞氏染色 白细胞分类 ?血液涂片厚薄是否适宜（与血量多少、血液的粘稠度、推片速度及推片与载玻片之间的角度有关）。好的涂片：血膜具有头、体、尾不同厚薄区域，血膜均匀；尾端形如弧形，血膜边缘整齐（留一定空隙） 血涂片分 布不均主 要原因： 推片边缘 不齐、 用力不均 匀、 载片不清 洁 。 瑞氏染色法 (Wright’s stain最经典、最常用) 瑞氏染料 ： 酸性染料伊红（eosin, E-） 碱性染料亚甲蓝（methylene blue, M+；又名美蓝）组成复合染料。 甲醇：溶解美蓝和伊红；固定细胞的形态；提高对染料的吸附作用。 加入甘油,防止甲醇挥发，染色清晰。 染色原理：血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料的伊红结合，被染为橘红或粉红色。细胞核蛋白、淋巴细胞胞质（浆）为酸性，与碱性的美蓝结合，被染为蓝色或紫色。中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，被染成紫红色。 染色方法 ① 用蜡笔在血膜两头画线，以防染液溢出。 ② 加瑞氏染液3 ～ 5 滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.5 ～1 min。 ③ 滴加等量或两倍量的磷酸盐缓冲液(或蒸馏水)于血膜上，用洗耳球将其吹匀，染色10-15 min。 ④ 平拿玻片，用流水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。 【 注意事项】 1.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。2 .染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料粘 在血膜上，不易冲掉。 3 .冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一 端缓缓将染液冲去，以免染料残渣粘附在血膜 上。4 .染色过深时，可用甲醇或乙醇适当脱色；染 色过浅需复染时，应先用缓冲液将染液稀释， 然后再染。 5 .白细胞分类完成，一定要用二甲苯把油镜的香 柏油擦掉。 镜下观察 白细胞分类 a.先用低倍镜观察，选择血涂片体尾交界部位细胞分布均匀、染色良好的区域。 b.在油镜下按一定的方向顺序（墙垛式）对所见到的每一个白细胞进行分类，既不重复亦不遗漏，共计数100 或200个白细胞。求出各类白细胞所占的百分率。 观察部位的选择 观察顺序 墙垛式（向下—向右—向上—向右，以此类推。）避免重复分类部位。 正常外周血细胞形态特点 白细胞 红细胞 血小板 白细胞 参考范围： 中性杆状核粒细胞（0.01-0.05） 中性分叶核粒细胞（0.50-0.70） 嗜酸性粒细胞（0.005-0.05） 嗜碱性粒细胞（0-0.01） 淋巴细胞（0.20-0.40） 单核细胞（0.03-0.08） 1.中性杆状核粒细胞 ⑴直径10~15μm，圆形。 ⑵胞质充满中性颗粒。 ⑶胞核凹陷程度超过核假设直径的一半，核径最窄处大于宽处1/3以上，形态弯曲成带状，粗细均匀，核染色质粗糙呈块状，也可见核呈“S”形，“U”形或“E”形，核两端钝圆染深紫红色。 【参考值】St ：0.01-0.05. 2.中性分叶核粒细胞 ⑴ 直径10~14μm，圆形，胞核分叶状，叶与叶之间有丝相连或完全断开，或者虽未断开，但有粗而明显的切痕。 ⑵核常分2~5叶，3叶多见，核染色质浓集或呈较多小块，染深紫红色， ⑶胞质丰富，染淡红色，浆内分布着细小紫红色中性颗粒。 【参考值】Sg： 0.50-0.70 3. 嗜酸性粒细胞 胞体：圆形，直径： 11～ 16μm。 胞核：多分为近似对称的两叶。 胞质：充满密集粗大、大小一致、分布均匀、小珠状、橘红色嗜酸性颗粒 。 【参考值】E：0.005～0.05。 4. 嗜碱性粒细胞 三种颗粒的比较 中性颗粒：细小而密集，呈淡红色，淡紫红色，粉沫状。 嗜酸性颗粒：粗大，呈小珠状，橘红色、金黄色、蓝红 色，有折光性，均匀布满胞浆。 嗜碱性颗粒：最大，大小不等，数目少，排列零乱，呈深 蓝色，易脱落，可覆盖在核上。 5.淋巴细胞 大淋巴细胞：呈圆形，直径13～18μm。 胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。染色质呈块状，排列均匀，深染呈深紫红色。 胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。 小淋巴细胞：呈圆形或椭圆形，直径6～10μm。 胞核圆形或椭圆形，核着边，染色质粗糙致密呈大块状，深紫红色。 胞质量极少，在核的一侧见到少量淡蓝色胞质，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。 【参考值】