慢性粒细胞白血病的实验室检查.docVIP

精品论文 参考文献 慢性粒细胞白血病的实验室检查 韩保良 安徽省六安市金安区妇幼保健院检验科 安徽六安 237000 摘要：目的 通过实验室检测方法研究慢性粒细胞白血病（CML）各期中EG5mRNA 的表达，并分析其与BCR/ABL mRNA 二者在正常人骨髓与外周血中的表 达相关性，对CML 诊断以及预后评估中EG5mRNA 的应用价值进行探讨。方法 取62 例慢粒病人外周血样本为本次研究对象，取8 名健康志愿者骨髓以及外周血 样本为参照，分别采用筑巢式逆转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR）、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对其中的BCR/ABL mRNA 和EG5mRNA 的表达进行实验 室检测。结果 经检测发现，健康外周血中未发现EG5 表达，而健康骨髓样本中则检测发现EG5 存在低丰度表达；在CML 辅助诊断中EG5 具有的特异性以及敏 感性依次为84.8%（28/33）、89.6%（26/29）；在CML 诊断中BCR/ABL mRNA 的特异性与敏感度则依次为90.9%（30/33）、96.5%（28/29），BCR/ABL 与EG5 在 CML 中的表达并无显著差异，不具有统计学意义（P＞0.05），但二者之间存在高度正相关。结论 在慢粒疾病进展中，BCR/ABL 与EG5 二者表达情况基本趋于一 致，对BCR/ABL 与EG5 进行动态观察和联合检测可辅助并支持CML 临床诊断，同时还可作为CML 患者临床疗效和预后的一项评估指标。 关键词： 慢性粒细胞白血病临床多称之为慢粒，属于多阶段疾病[1]。其中粒 细胞为其优势增殖细胞系。诊断后慢粒患者生存期平均约为3~5a，其慢 性期阶段历时较长[2]。CML 实验室检测随着科学与医疗技术的不断发 展而逐渐成熟，并由初始阶段的形态诊断逐渐发展至细胞遗传学诊断， 其诊断分型至今已达到分子生物学水平[3]。本文分析了慢性粒细胞白血 病（CML）各期中EG5mRNA 的表达，并对其与BCR/ABL mRNA 二者 在正常人骨髓与外周血中的表达相关性展开研究，对CML 诊断以及预 后评估中EG5mRNA 的应用价值进行探讨，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料 取2009 年7 月~2012 年12 月期间在院接受治疗的CML 病人62 例为研究对象，本组患者病情均符合美、英、法协作组制订的CML 诊断标准相符合，且经临床表现、骨髓象以及血象检测确诊。其中 男35 例，女27 例，年龄9~69 岁，平均年龄（35.8plusmn;4.22）岁。对 其外周血进行血样采集；取同期健康志愿者8 例为参照，其中男性6 例，女2 例，年龄22~37 岁，平均年龄（31.8plusmn;2.55）岁，采集本组 患者外周血和骨髓样本。 1.2 检测方法 1.2.1 引物 参照人体BCR/ABL mRNA、C-ABL、EG5mRNA 序列以及融合 基因断裂位点，采用DNA-Star 以及Primer preimer5 设计引物，本次 研究引物由上海生工公司提供。第一轮BCR/ABL PCR 引物采用 ABL-B 以及BCR-A，第二轮则为ABL-D、BCR-C，其中b2a2 型和 b3a2 型转录本产物分别为285bp、360bp。460bp 为EG5 PCR 产物。 1.2.2 合成cDNA 取RNA1mu;g，反应体系20mu;l 中含有DNTPs 1mmol/L、1times; M-MuLV RT Buffer、40IU 的RNAase 抑制剂、200IU M-MuLV 逆转 录酶、随机引物1mmol/L，本组试剂均由Takara 公司生产， 42℃水 浴处理，2h 后保存于4℃环境下待用。 1.2.3 EG5 RT-PCR 反应环境 在体积为23.5mu;l，含有1.5 单位Taq 酶、100mu;mol/L dNTP、 2.5mmol/L 氯化镁、5times;PCR buffer 以及各100 pmol/L 上下游引物的 反应体系中加入1.5ml 逆转录产物，试剂由Takara 公司提供，混匀 后以石蜡封盖。实验循环条件为：分别在95℃、94℃、55℃、72℃ 环境下作5min、30s、45s、45s 的预变性处理，循环次数为30。采用 琼脂糖凝胶（10g/L）对10mu;l PCR 产物进行电泳处理，在紫外线灯 下对实验结果进行观察并摄像，产物表达强度采用GSM 凝胶图像管 理系统进行分析，结果判断标准参照