S-腺苷同型半胱氨酸联合 TSA对人胃癌SGC-7901细胞株增殖及P21WAF1基因表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 S-腺苷同型半胱氨酸联合 TSA对人胃癌SGC-7901细胞株增殖及P21WAF1基因表达的影响 胡光胜 廖丹 石巍 姚育红 曾斌 廖爱军（南华大学附一医院消化内科 湖南衡阳 421001） 【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)35-0069-03 【摘要】 目的 研究S-腺苷同型半胱氨酸(S-Adenosyl-L-homocysteine，SAH)联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用和对P21WAF1基因表达的影响。方法 在人胃癌SGC-7901细胞中加入不同浓度的SAH（0.1﹑0.2﹑0.4﹑0.8mmol/L）+ TSA（400ng/ml）进行培养。用MTT、RT-PCR及Western-blotting法检测细胞生存率、P21WAF1mRNA及蛋白的表达。结果 不同浓度的SAH+TSA处理人胃癌SGC-7901细胞24、48、72h后，SAH和TSA呈时间、浓度依赖性地抑制胃癌细胞的生长；并呈浓度依赖性的上调胃癌细胞中P21WAF1的蛋白和mRNA的表达。结论 SAH联合TSA以时间及浓度依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖，可能与上调抑癌基因P21WAF1的表达有关。 【关键词】 胃癌 S-腺苷同型半胱氨酸 曲古抑菌素-A P21WAF1 增殖 S-腺苷同型半胱氨酸（S-Adenosyl-L-homocysteine，SAH）是一种对依赖甲硫氨酸的甲基转移酶有潜在竞争性抑制作用的甲基化抑制剂。SAH的含量增加可抑制甲基转移酶活性，使机体表观遗传特性发生改变，导致基因异常表达或沉默。曲古抑菌素A(trichostatin A, TSA)是组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors, HDAIS)之一。组蛋白的N一末端可通过乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等进行翻译后修饰，通过这些修饰改变DNA与组蛋白之间的相互作用，影响染色质的松散和集缩，从而激活或抑制转录，其中以组蛋白乙酰化和甲基化尤为重要。近年来研究表明乙酰化酶抑制剂TSA对肿瘤细胞有明显的抑制作用[1-2]。有研究表明选择性组蛋白甲基化抑制剂SAH对肿瘤细胞也有抑制作用。但二者联合作用的效果如何，以及他们可能的作用机制尚不清楚。 HDAC抑制剂能活化胃癌细胞中的P21WAF1基因，而P21WAF1基因活化能使癌细胞的增殖受抑。在SW48细胞中P21WAF1的表达与组蛋白H3-K9的低甲基化密切相关[2]。本实验同时用HDAC抑制剂TSA和组蛋白甲基化抑制剂SAH作用于胃癌细胞，观察它们对胃癌细胞增殖的影响，并了解组蛋白甲基化与乙酰化在胃癌形成机制中可能存在的作用。 1 材料与方法 1.1 细胞株及培养 人胃癌SGC-7901细胞株由南华大学附属第一医院研究所提供,在含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,5%CO2培养箱中进行培养。 1.2 主要试剂 胎牛血清购自杭州四季青公司;MTT 试剂购自美国Gibco公司;P21WAF1单克隆抗体购自Santa Cruz 公司; Trizol购自美国Invitrogen 公司; MMLVcDNA第一链合成试剂盒、即用PCR扩增试剂盒、P21WAF1及GAPDH 引物购自上海生工生物工程公司;蛋白质测定试剂购自江苏海门碧云天公司; SAH及TSA购自美国Sigma公司。 1.3 实验方法 1.3.1 MTT法测定细胞增殖 取对数生长期细胞，接种于96孔培养板，每孔100mu;L在37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养12小时后，分别以终浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.8mmol/L的SAH(参照文献[2])+400ng/mlTSA（本实验组前期[3]已证实为半数有效浓度）的RPMI 1640培养液100 mu;L作用细胞，阴性对照组加100mu;L完全培养基，分别培养24、48、72小时后，加5g/L MTT 20mu;L/孔（调零组除外），再培养4小时，吸去上清液加DMSO 100mu;L/孔，待甲臜完全溶解后，用ELX-800型酶联免疫仪在波490nm波长测吸光值，并计算细胞的生长抑制率（IR）：IR＝（对照组OD值－用药组OD值/对照组OD值-空白组OD值）times;100%。 1.3.2 RT-PCR检测P21WAF1的mRNA的表达　 RT-PCR 法测定P21WAF1mRNA 表达　P21WAF1引物: sense5rsquo;-CGTGGTGGTG -