促红细胞生成素论文：EPO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤缺氧you导因子1α及存活素表达的影响.docVIP

促红细胞生成素论文：EPO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤缺氧诱导因子1α及存活素表达的影响 【中文摘要】缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是导致新生儿急性死亡及慢性神经系统损伤的主要原因之一。研究表明，促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)有脑保护作用，本实验通过建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型，腹腔内注射外源性重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)，观察EPO对新生鼠HIBD时缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)及存活素(Survivin)表达的影响，探讨其抗凋亡的可能机制，为临床应用EPO治疗新生儿HIE提供新的理论依据。方法：将7d Wistar大鼠120只随机分为3组：假手术组(n=8)、HIBD组(n=56)、rhEPO治疗组(n=56)，后两者根据处死时间分为：3h组，6h组，12h组，24h组，48h组，3d组，7d组，每组8只。假手术组新生大鼠行常规消毒后切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉，不予缺氧处理；HIBD组新生大鼠分离左侧颈总动脉并给予结扎，后置于缺氧仓中（8%O2和92%N2混合气体）2h；rhEPO治疗组于HIBD模型建立后即刻、24h、48h连续腹腔注射rhEPO(5 000 IU/kg/d)。各组新生鼠于相应时间点处死取脑组织后观察脑外观的变化，采用HE染色镜下观察脑组织的病理学改变，应用免疫组化法测定HIF-1、Survivin的表达，用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferasemediated nick end labeling, TUNEL）对细胞凋亡指数（apoptosis index, AI）进行检测。结果：（1）新生大鼠缺氧缺血后可见大脑左侧有不同程度的水肿，rhEPO治疗后左侧脑水肿程度较HIBD组减轻。（2）HE染色：假手术组新生大鼠脑组织结构和细胞层次清楚，细胞排列规整，形态尚正常，可见少数细胞胞浆皱缩，核深染；HIBD组各时间点新生大鼠左侧脑组织呈现不同程度的水肿，可见坏死，胞核固缩、溶解，神经细胞数减少；rhEPO治疗组各时间点大鼠脑组织损伤程度与HIBD组相比有所减轻。（3）免疫组化染色：①HIF-1的表达：HIF-1阳性细胞主要表达于大脑皮层和海马区，阳性着色位于神经细胞胞质和（或）胞核，呈棕黄色细颗粒沉积。HIF-1的表达在假手术组中呈少量表达；在HIBD组，缺氧缺血后3h即增强，12h达高峰，后逐渐降低(P＜0.01)；rhEPO治疗组12h、24h、48h、3d的HIF-1表达水平较HIBD组明显减少(P＜0.05)。②Survivin的表达：Survivin阳性细胞主要表达于大脑皮层和海马区，阳性着色位于神经细胞胞质和（或）胞核，呈棕黄色细颗粒沉积。Survivin的表达在假手术组仅少量表达；在HIBD组，缺氧缺血后12h开始增高，7d明显增高，与假手术组相比，除3h、6h组，差异有统计学意义(P＜0.01)；rhEPO治疗组12h、24h、48h、3d的Survivin表达较HIBD组明显增高(P＜0.05)。（4）神经细胞凋亡趋势：细胞AI在假手术组中较低；在HIBD组缺氧缺血6h即增高，7d明显增高，与假手术组相比，除3h组，差异有统计学意义(P＜0.01)；rhEPO治疗组24h、48h、3d、7d的细胞AI值较HIBD组明显降低(P＜0.05)。结论：(1)通过镜下观察HE染色结果证实，rhEPO治疗组各时间点与HIBD组比较，新生鼠脑组织病理损伤程度有所减轻，从病理学证实应用EPO治疗后可减轻HIBD。(2)脑缺氧缺血可导致脑皮质及海马区神经细胞凋亡，同时可提高HIF-1和Survivin的表达，说明HIF-1和Survivin共同参与了新生大鼠HIBD的病理过程。(3)应用EPO治疗后，通过抑制HIF-1的过表达及提高Survivin的表达，进而抑制神经细胞凋亡，从而在新生鼠HIBD时发挥其脑保护作用，这可能是EPO脑保护作用机制之一。 【英文摘要】: Hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is a main cause of newborn acute death andchronic nervous system damage. Study has indicated that erythropoietin (EPO) has a protectiveeffect on the