植物细胞工程实验指导.docVIP

实验一 植物组织培养培养基的配制 【】【仪器及试剂】仪器：试剂：【操作步骤】①大量元素：一般配成使用浓度的10－20倍，浓度太大的母液在冰箱保存时会结晶。除钙盐外，其它大量元素按一定倍数分别称量并分别用蒸馏水溶解后混合在一起，最后加蒸馏水定容。钙盐要单独配制，不能和PO43-、SO42-混合，以免生成Ca3(PO4)2或CaSO4，发生沉淀。 ②微量元素：微量元素因用量小，为称量方便及精确起见常配成100倍或1000倍的母液，即每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐个溶解并混合在一起。 ③铁盐：微量元素中的铁盐是单独配制的，由硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）5.56克和乙二铵四乙酸二钠（Na2-EDTA）7.46克溶于1升水中配成。每配1升培养基加铁盐5毫升。 ④有机物质：主要指氨基酸和维生素物质，它们都是分别称量及分别用容量瓶配成所需浓度（0.1－10毫克/毫升），用时按培养基配方中要求的量分别加入。这些化合物都易溶于水，直接用水配制。 ⑤生长调节物质：一般配成0.1－1.0毫克/毫升。 生长素类IAA、NAA、2,4-D等，配制时先按要求浓度称好药品，置于小烧杯中，用1－2毫升0.1 N氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。如果用少量95％的乙醇来溶解亦可，有时效果不如氢氧化钠好。 配制细胞分裂素类物质时，则宜先用少量0.5 N或1 N盐酸来溶解，然后加蒸馏水至所需量。 2、配制培养基 ①吸取各种母液，按培养基配方吸取一定量的各种母液混合在一起。大量及微量元素的母液吸取量为： 母液吸取量（ml）= 配制培养基的数量（ml）/ 母液扩大倍数 有机物及生长调节物质的母液吸取量为： 母液吸取量（ml）= 每升培养基要求的含量（mg）/ 每毫升母液中的含量（mg） ②称取一定量的蔗糖（或葡萄糖等），溶解后与1混合。 ③ 称取一定量的琼脂，加蒸馏水，加热使其熔化成透明状后，和1合并。 ④用热蒸馏水定容到一定体积，继续加热，不断搅拌，直至琼脂完全溶解。 ⑤ 用pH计或精密pH试纸测pH值，用1 N或0.1 N氢氧化钠或盐酸将培养基的pH值调至5.8－6.0。 ⑥将配好的培养基用漏斗或分装器分装到干净的培养瓶内。琼脂约在40℃时才凝固，所以有足够的时间来进行分装工作。 ⑦用封口膜封口，并对不同的培养基及时做好标记。 3、灭菌 通常培养基应在汽相120℃的条件下在高压锅内灭菌20分钟。在高压灭菌锅的加热过程中，在气压指针上升到0.5公斤/厘米2时，放一次气，然后在温度达120℃、1.1公斤/厘米2时，保持此压力灭菌15－20分钟。灭菌完成后，待灭菌锅的压力0降到时，打开灭菌锅，取出培养瓶，放平，待培养基凝固后备用。 【注意事项】1．实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。 2．用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放在小烧杯中称量。3．各种母液应保存在2－4℃的冰箱中，以免变质、长霉。 4．吲哆乙酸（IAA）受热不稳定，所以不能和培养基一起灭菌，要过滤除菌。。附：【原理】【】【仪器、材料及试剂】 仪器 材料 试剂【操作步骤】【注意事项】操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼冷却后才能夹取组织，以免烧焦。不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。【】【】【原理】【】【仪器、材料及试剂】仪器：材料： 3．试剂：【操作步骤】【注意事项】操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼冷却后才能夹取组织，以免烧焦。不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。【】【】【原理】【】【仪器、材料及试剂】仪器：培养瓶、材料：试剂：【操作步骤】【注意事项】操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼冷却后才能夹取组织，以免烧焦。不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。【】【】【原理】【】【仪器、材料及试剂】仪器：材料： 3．试剂：【操作步骤】【注意事项】操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼冷却后才能夹取组织，以免烧焦。不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。附：：【】【】【原理】【】【仪器、材料及试剂】仪器：吸管、移液管、37℃）离心机材料：试剂：【操作步骤】①将从烟草和番茄的幼嫩叶片中新分