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从葡萄籽中提取的寡聚原花青素在激活的肝星状细胞中抑制NFkB信号传导: 参与JNK /ERK MAPK和PI3K / Akt通路在本研究中，我们旨在揭示葡萄籽中低聚原花青素（OPC）对脂多糖（LPS）活化，HSC-T6，大鼠肝星状细胞系的潜在抗纤维化作用.。HSC-T6细胞在加入LPS前用OPC处理1小时，然后在指定时间内孵育。OPC抑制HSC-T6细胞的细胞活力，并减少在lps诱导的HSC-T6细胞中胶原蛋白I，α-平滑肌肌动蛋白（a-SMA），金属蛋白酶I（TIMP-1）组织抑制剂在LPS诱导的蛋白表达。OPC还显着抑制LPS刺激的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K），蛋白激酶B（Akt），细胞外信号调节激酶（ERK）和c-Jun N-末端激酶（JNK）的磷酸化。 此外，OPC预处理阻止LPS-引发的核因子κB（NF-kB）从细胞质转移到核。 OPC，以及NF-kB，PI3K和JNK的特异性抑制剂可以有效抑制α-SMA和胶原蛋白I的表达。 总之，我们证实了OPC的抗纤维化机制可能通过JNK / ERK MAPK和PI3K / Akt磷酸化抑制NF-kB的活化来参与HSC活化和转分化的抑制。 因此，OPC通过涉及MAPK-PI3K / AKT途径的NF-kB调节具有HSC活化的潜在抑制性质。1.介绍肝纤维化是慢性肝炎的常见病理结果，最终会导致肝硬化甚至肝癌。肝纤维化进展的特点是细胞外基质过多(ECM)沉积，包括胶原蛋白I和平滑肌肌动蛋白(a - sma) [1]。活化的肝星状细胞(HSC)在肝纤维化中起着关键作用，所以控制肝星状细的活化是抗纤维化治疗的理想靶点。[2]通过不同的刺激，静止的肝星状细胞被激活和分化，然后由肝星状细胞产生的大量的细胞外基质(ECM)沉积于纤维组织[3,4]。在HSC激活过程中，ECM定量地和定性地增加。这些过度的ECM导致了ECM降解与生成的不平衡。因此，抑制HSC的增殖和活化是一种理想肝纤维化的治疗方法。脂多糖(LPS)，革兰氏阴性细菌的主要细胞壁成分，是toll样受体4(TLR4)的主要配体，在许多类型的肝细胞中表达，包括Kupffer细胞，肝细胞和HSCs。特别是,TLR4在HSC中的表达在肝纤维化中起关键作用[5]。肝损伤后,肠粘膜渗透性增加，导致内毒素易位增加[6]。虽然库普弗细胞是LPS的最佳表征靶点，但HSC也对低浓度的肠源性内毒素具有高度的反应[7]。在人肝标本分离的活化HSC中也观察到LPS诱导的核因子-κB（NF-kB）活化[8]。NF-kB在HSC活化和纤维发生的进程中起关键作用[9]nf - kb是二聚体转录因子家族，在肝纤维化的发展过程中起着核心作用[10]。nf - kb激活发生在活化的HSCs中，nf - kb抑制剂可以有效阻断小鼠肝纤维化[11]。因此，阻断nf - kb信号通路可以抑制HSC激活，进而减弱肝纤维化。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/ Akt通路可增强NF-kB的转录活性[12] 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和PI3K /蛋白激酶B（AKT）之间的串扰可能会调节细胞存活[13] JNK，PI3K和Akt的激活诱导具有促纤维化作用的HSC的激活[14,15]。已经使用药理学或遗传学方法建立了对HSC中PI3K / Akt信号传导的抑制，从而抑制HSC的激活[16]。因此，通过MAPK和PI3K / Akt途径靶向NF-kB的新药物和方法可能有益于阻断肝纤维化进展。因此，通过MAPK和PI3K / Akt途径靶向NF-kB的新药物和方法可能有益于阻断肝纤维化进展。低分子原花青素复合物（OPC，也称为原花青素），一类类黄酮化合物，通常从葡萄籽以及各种水果和蔬菜中获得，具有有效和广泛的药理和治疗活性[17]。OPC是一种高分子量的聚合物，包括原花青素，原花翠素类和花葵素[ 18 ]。OPC是功能强大的抗氧化剂，可以摆脱自由基。丰富的体内科学证据表明，OPC防护小鼠酒精 - 四氯化碳 - ，二甲基亚硝胺 - 或硫代乙酰胺 - 诱导的肝纤维化[19-22]。来自蓝莓V.virgatum的叶片的原花青素阻断了血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的人类HSC活化[23]，表明OPC可能是肝纤维化的潜在治疗剂。然而，OPC在抑制通过MAPK和PI3K / Akt信号传导的HSC活化的确切机制迄今尚未得到充分阐明。在目前的研究中，我们利用LPS激活的HSC体外模型来研究OPC的潜在抗纤维化作用。我们的数据表明OPC通过在纤维化过程中抑制NF-kB活化来抑制HSC转分化，并且这些事件可能由ERK / JNK MAPK和PI3K / Akt途径介导。2.材料和方法2.1材料来自于伊方科技有限公司（中国天津）的葡萄籽中的OPC（纯度 99.80％）。LPS和二甲基亚砜（DMSO）购自S